Методы исследования. Метод определения активности катепсина D

Материалы » Антиоксидантная система при внутриутробной гипоксии плода » Методы исследования. Метод определения активности катепсина D

Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл) смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20 мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=750 нм. Активность фермента определяли как разность в оптической плотности между опытными и контрольными пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли методом Лоури.


Это интересно:

Витамин K
Витамин К (филлохинон, фаркохинон, викасол). Суточная потребность взрослого человека - 2 мг. Поступает в организм с пищей, частично образуется микрофлорой кишечника. Способствует нормальному свертыванию крови, образованию протромбина в пе ...

Концепции современного естествознания
"Истина скрыта в глубине (лежит на дне морском)" Великий философ древности Демокрит V в. до н. э. Часто встречающееся утверждение: главная цель естествознания - установление законов природы, открытие скрытых истин - явно или ...

Практическая работа. «влияние рекреационных нагрузок на видовой состав лесного биоценоза»
Цель: оценить изменение видового состава растений лесного биоценоза под влиянием рекреационных нагрузок (вытаптывание). Введение: Под рекреационной нагрузкой подразумевают комплексное воздействие отдыхающих людей на природные экосистемы. ...