Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл) смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20 мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=750 нм. Активность фермента определяли как разность в оптической плотности между опытными и контрольными пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли методом Лоури.

Это интересно:

Пути выхода из кризиса. Охрана Азовского моря как среды обитания кефалей
Если вы не на стороне решения, вы на стороне проблемы От рыбных запасов моря зависит экономическое состояние приморских регионов, рыболовецких хозяйств, осуществляющих промысел в его водах. Таким хозяйством на территории Генического рай ...

Охраняемые природные территории
Охраняемые территории – территории, на которых обеспечивается поддержание стабильности природной среды путём установления в административном порядке особых режимов природопользования. Это национальные парки (это объекты природоохраняемог ...

Анализ вирусных РНК и белков методом электрофореза в полиакриламидном геле. Анализ белков
Синтезированные in vivo или in vitro меченые белки можно анализировать с помощью электрофореза в 10% -ном или б - 15% -ном градиентном полиакриламидном геле, как описано Марсденом и др. . После электрофоретического разделения в полиакрил ...