Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл) смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20 мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=750 нм. Активность фермента определяли как разность в оптической плотности между опытными и контрольными пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли методом Лоури.

Это интересно:

Саркодовые. Отряд амёбы (строение, размножение, практическое значение)
Низшие, наиболее просто устроенные корненожки, лишённые скелета. Большинство амёб – обитатели пресноводных водоёмов. Некоторые виду живут в море, а так же в почве. Небольшое число – паразиты. Размеры амёб различны: от 10-15 мкт до 2-3 мм. ...

Понятие возраста человека. Типы возраста: абсолютный, биологический, паспортный, психический, социальный. Критерии биологического возраста
Для начала следует упомянуть о различных видах социальных ролей: основанные на личном достижении – достигнутые, и роли унаследованные, или приписанные. Возрастным статусом (ребенка, подростка, взрослого гражданина ) называется положение ...

Основы генной инженерии и её роль: Материальная основа наследственности бактерий
Материальной основой наследственности, определяющей генетические свойства всех организмов, в том числе бактерии и вирусы, является молекула ДНК. Исключение составляют только РНК-содержащие вирусы, у которых генетическая информация закодир ...