Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл) смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20 мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=750 нм. Активность фермента определяли как разность в оптической плотности между опытными и контрольными пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли методом Лоури.

Это интересно:

Хар-ка животных группы амниоты
Амниоты - пресмыкающиеся - наземные позвоночные, с переменной температурой тела. Шея хорошо выражена, конечности пятипалые, но у некоторых они частично или полностью редуцированы. Кожа сухая, с сильным ороговением эпидермиса. Её поверхнос ...

Гигантский муравьед
Муравьеды питаются только муравьями и термитами. Самый крупный представитель – гигантский муравьед. У него большой пушистый хвост и вытянутая морда. У муравьедов помельче морды гораздо короче, а хвост помогает лазать по деревьям. Поэтому ...

Понятие «наука» (сущность, содержание, функции, цели, задачи, критерии выделения)
Наука – исторически сложившаяся форма человеческой деятельности направленная на познание и преобладание эффективной деятельности Наука – это рациональный способ познания мира основанный на эмпирической проверки и математических наук. Су ...