Методы исследования. Метод определения активности катепсина D

Материалы » Антиоксидантная система при внутриутробной гипоксии плода » Методы исследования. Метод определения активности катепсина D

Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл) смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20 мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=750 нм. Активность фермента определяли как разность в оптической плотности между опытными и контрольными пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли методом Лоури.


Это интересно:

Класс пеннатофициевые —pennatophyceae
Створки вытянутые, с двусторонней симметрией. У одних шов щелевидный, что характерно для порядка навикулальные, или каналовидный, у других шов отсутствует — порядок фрагиляриальньге. Половой процесс по типу конъюгации. К пеннатофициевым о ...

Переносчики: разнообразие функций
Функции переносчиков весьма разнообразны; проиллюстрируем их на нескольких примерах. Таблица 2. Сравнение скоростей транспорта для некоторых систем. Система Скорость транспорта, с-1 Н+-лактозопермеаза Е 30 Переносчик ...

Соленость
Главную роль в химизме озерных вод аридной зоны играют Са(НСО3)2, Mg(НСО3)2, Na2SO4, MgSO4 и NaCl. Поскольку основной особенностью пустынной зоны является преобладание испарения над осадками, каждое озеро пустынной области имеет отрицател ...