Методы исследования. Метод определения активности катепсина D

Материалы » Антиоксидантная система при внутриутробной гипоксии плода » Методы исследования. Метод определения активности катепсина D

Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл) смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20 мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=750 нм. Активность фермента определяли как разность в оптической плотности между опытными и контрольными пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли методом Лоури.


Это интересно:

Строения цепней
Цистоды (ленточные черви) – один из развитых класс червей. Совершенно новый тип симметрии – метомерия – симметрия сдвига. Один фрагмент тела явл-ся симметричным предыдущему. Один сегмент тела не похож на все последующие – головка или скол ...

Учение о внутренних органах (спланхнология). Теоретическая анатомия внутренних органов.
Системы обеспечения движений. Пищеварительная, дыхательная, мочеполовая, сердечно – сосудистая и лимфатическая система человека. Функции органов систем обеспечения, их функциональная взаимосвязь и адаптация к физическим нагрузкам. Общая ...

Управление половыми циклами у рыб различными методами
В практике искусственного рыборазведения применяют 3 метода стимулирования созревания половых продуктов у производителей рыб: экологический, физиологический и эколого-физиологический. Для лососевых рыб применяют экологический метод, кото ...