Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл) смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20 мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=750 нм. Активность фермента определяли как разность в оптической плотности между опытными и контрольными пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли методом Лоури.

Это интересно:

Денатурирующий градиентный гель-электрофорез
Два фрагмента ДНК, различающиеся лишь делецией, инсерцией или заменой одного нуклеотида, или единственным неспаренным нуклеотидом, можно легко разделить при помощи денатурирующего градиентного гель-электрофореза, ДГГЭ. Принцип метода закл ...

Отряд жесткокрылые
У всех жуков ротовые части грызущего типа. Личинки бывают двух типов: более примитивные камподеоидные (названы так по сходству с бескрылым насекомым камподеей) — уплощенные, подвижные, с длинными ногами и хвостовыми придатками — церками, ...

Отряд голуби (Columbiformes)
К голубеобразным принадлежат 3 семейства: рябковые (Pterocletidae, 16 видов), дронтовые (Rhaphidae, 3 вида) и голубиные (Columbidae, 297 видов). Этих птиц объединяет ряд важных анатомических и морфологических признаков в строении скелета, ...