Для определения активности катепсина D использовали 7,5%-ый гомогенат ткани на натрий-ацетатном буфере (рН 3,3). Препарат фермента (20 мкл) смешивали с 60 мкл 100 мМ натрий-ацетатного буфера (рН 3,3) и преинкубировали 8 мин при температуре 37°С. Начинали реакцию прибавлением в опытные пробы 20 мкл 8% раствора гемоглобина, полученного из бычьей крови. Реакцию останавливали через 40 мин прибавлением 100 мкл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы добавляли 20 мкл 8% раствора гемоглобина. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. После центрифугирования отбирали 100 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося тирозина методом Лоури. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=750 нм. Активность фермента определяли как разность в оптической плотности между опытными и контрольными пробами. Активность фермента выражали в нмоль тир, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли методом Лоури.

Это интересно:

Концентрация гидроперекисей в плацентарной ткани в норме и при хронической внутриутробной гипоксии плода
Согласно результатам исследования при хронической внутриутробной гипоксии плода концентрация гидроперекисей в плацентарной ткани повышалась в 1,25 раза по отношению к норме (рис. 8). Рис. 8. Концентрация гидроперекисей в плацентарной т ...

Определение устойчивости к гипоксии крыс и адаптация к ней низкоустойчивых крыс
Группу самцов линии Вистар, поместив в барокамеру и снизив давление до 22 кПа, подвергли острой гипобарической гипоксии, соответствующей подъему на высоту 11500 м. Те животные, что выдерживали гипоксию в течение 10-15 минут, считались выс ...

Трихомонады: строение и развитие
Паразитирующие простейшие, несущие несколько жгутиков, иногда обладающие опорным тяжем – аксостилем и ундулирующей мембраной. В человеке паразитирует в кишечнике, в мочевых путях. ...