Основное внимание уделено экспериментальным особенностям каждой стадии процесса РНКазного расщепления, включая получение меченого РНК-зонда. Большинство этапов аналогично описываемым в оригинальных работах, но приведены и некоторые модификации. Обсуждаются также возможные методические трудности и способы их преодоления.

Отметим, что для данного метода необязательно, чтобы концевые участки РНК-зонда и тестируемого образца ДНК были строго комплементарны. Выступающие некомплементарные 5'или З'-концы зонда не мешают анализу, так как они просто разрушаются РНКазой в процессе реакции расщепления. В принципе даже полезно иметь выступающие концы, удлиняющие зонд на 5–10% по сравнению с фрагментом ДНК – Это позволяет различать зонд и гибридный фрагмент дикого типа, получающийся при РНКазном расщеплении. Кроме того, выступающие концы дают возможность проверить активность РНКазы: если фермент инактивирован или активность его недостаточна, то не происходит их эффективного удаления и они обнаруживаются при радиоавтографии.

Это интересно:

Моллюски
Моллюски (мягкотелые) – древние обитатели нашей планеты – появились около 450-500 млн. лет назад. Среди характерных их признаков отмечают известковую раковину, которая (или остаток, рудимент которой) имеется у большинства моллюсков. Мол ...

Гусиный лук желтый
Является одним из обычных наших эфемероидов . Он растет по лесам, лесным оврагам, кустарникам, всречается в парках. Гусиный лук - самый мелкий представитель семейства лилейных. Мы уже знаем, что короткий вегетационный период при неблагоп ...

Железы
Железы выполняют в организме секреторную функцию. Выделяемые ими вещества имеют значение для процессов, протекающих в организме. Часть желез является самостоятельными органами (например, околоушная слюнная железа, поджелудочная железа), д ...