Основное внимание уделено экспериментальным особенностям каждой стадии процесса РНКазного расщепления, включая получение меченого РНК-зонда. Большинство этапов аналогично описываемым в оригинальных работах, но приведены и некоторые модификации. Обсуждаются также возможные методические трудности и способы их преодоления.

Отметим, что для данного метода необязательно, чтобы концевые участки РНК-зонда и тестируемого образца ДНК были строго комплементарны. Выступающие некомплементарные 5'или З'-концы зонда не мешают анализу, так как они просто разрушаются РНКазой в процессе реакции расщепления. В принципе даже полезно иметь выступающие концы, удлиняющие зонд на 5–10% по сравнению с фрагментом ДНК – Это позволяет различать зонд и гибридный фрагмент дикого типа, получающийся при РНКазном расщеплении. Кроме того, выступающие концы дают возможность проверить активность РНКазы: если фермент инактивирован или активность его недостаточна, то не происходит их эффективного удаления и они обнаруживаются при радиоавтографии.

Это интересно:

Связи ископаемых насекомых с современными
Paleoptera Находки ископаемых насекомых, принадлежащих четырем вымершим и двум современным отрядам Paleoptera, свидетельствуют о том, что два выживших отряда - Ephemeroptera (поденки; рис. 13, А и Б) и Odonata (стрекозы) - это всего лишь ...

Биологическая общность гоминид. Морфологические признаки гоминизации.
• Прямохождение (бипедия или ортоградность). • Приспособленная к тонкому манипулированию кисть с противопоставляющимся большим пальцем. • Высокоразвитый относительно крупный мозг. Все эти признаки составляют так называемую "гомини ...

Наблюдения за обитателями водоема - водомерка
Большая водомерка. Размеры ее 13-17 мм. Обитает на поверхности воды. Тело узкое, вытянутое, рыжеватой окраски. Имеются крылья и надкрылья. Передняя пара конечностей укорочена и служит для захвата добычи (водомерка – хищник). Средние и зад ...