Основное внимание уделено экспериментальным особенностям каждой стадии процесса РНКазного расщепления, включая получение меченого РНК-зонда. Большинство этапов аналогично описываемым в оригинальных работах, но приведены и некоторые модификации. Обсуждаются также возможные методические трудности и способы их преодоления.

Отметим, что для данного метода необязательно, чтобы концевые участки РНК-зонда и тестируемого образца ДНК были строго комплементарны. Выступающие некомплементарные 5'или З'-концы зонда не мешают анализу, так как они просто разрушаются РНКазой в процессе реакции расщепления. В принципе даже полезно иметь выступающие концы, удлиняющие зонд на 5–10% по сравнению с фрагментом ДНК – Это позволяет различать зонд и гибридный фрагмент дикого типа, получающийся при РНКазном расщеплении. Кроме того, выступающие концы дают возможность проверить активность РНКазы: если фермент инактивирован или активность его недостаточна, то не происходит их эффективного удаления и они обнаруживаются при радиоавтографии.

Это интересно:

Сканирующая электронная микроскопия
Для подготовки клеток к сканирующей электронной микроскопии применяют следующий метод. 1. Клетки, образующие неплотный монослой на покровных стеклах, фиксируют 1-2 ч 2,5% -ным раствором глутарового альдегида в фосфатном буфере. 2. Стекл ...

Отличительные особенности строения свиного и бычьего цепня
1 Бычий цепень (невооруженный): 2 Длина тела –12м, 3 На голове 4 присоски, 4 стробила состоит из 100-1000 члеников, 5 матка зрелого членика имеет до 35 отверстий с каждой стороны, 6 число яиц в ней до 100тыс, 7 вышедшие поодиночке ...

Биогенная миграция атомов и биогеохимические принципы
Закон биогенной миграции атомов В.И. Вернадского гласит - «миграция химических элементов на земной поверхности и в биосфере в целом осуществляется или при непосредственном участии живого вещества (биогенная миграция), или же она протекает ...