Основное внимание уделено экспериментальным особенностям каждой стадии процесса РНКазного расщепления, включая получение меченого РНК-зонда. Большинство этапов аналогично описываемым в оригинальных работах, но приведены и некоторые модификации. Обсуждаются также возможные методические трудности и способы их преодоления.

Отметим, что для данного метода необязательно, чтобы концевые участки РНК-зонда и тестируемого образца ДНК были строго комплементарны. Выступающие некомплементарные 5'или З'-концы зонда не мешают анализу, так как они просто разрушаются РНКазой в процессе реакции расщепления. В принципе даже полезно иметь выступающие концы, удлиняющие зонд на 5–10% по сравнению с фрагментом ДНК – Это позволяет различать зонд и гибридный фрагмент дикого типа, получающийся при РНКазном расщеплении. Кроме того, выступающие концы дают возможность проверить активность РНКазы: если фермент инактивирован или активность его недостаточна, то не происходит их эффективного удаления и они обнаруживаются при радиоавтографии.

Это интересно:

Раскройте сущность микро- и макроэволюции, приве­дите примеры действующих в них процессов. Каковы доказательства эволюции органического мира?
Современная эволюционная теория подразделяет сложный эволюционный процесс на два этапа: макро- и микроэволюцию. Знание элементарных представлениий, лежащих в основе эволюции, позволяет повысить точность анализа сложных процессов макроэвол ...

Основные разделы биофизики
По решению Международной ассоциации общей и прикладной биофизики, к разделам этой дисциплины относятся: 1. Молекулярная биофизика. Изучает строение и физические свойства молекул, входящих в состав организма (прежде всего белков и нуклеин ...

Определение индекса атерогенности (ИА) расчетным методом
Расчет индекса атерогенности призводят по формуле: ХСпл – £-ХС /£-ХС Х (ЭХС/СХС) ХСпл – общий холестерол плазмы £-ХС (альфа-ХС) – холестерол супернатанта (ЛПВП) ЭХС/СХС – отношение содержания эфиросвязанного и свобод ...