Основное внимание уделено экспериментальным особенностям каждой стадии процесса РНКазного расщепления, включая получение меченого РНК-зонда. Большинство этапов аналогично описываемым в оригинальных работах, но приведены и некоторые модификации. Обсуждаются также возможные методические трудности и способы их преодоления.

Отметим, что для данного метода необязательно, чтобы концевые участки РНК-зонда и тестируемого образца ДНК были строго комплементарны. Выступающие некомплементарные 5'или З'-концы зонда не мешают анализу, так как они просто разрушаются РНКазой в процессе реакции расщепления. В принципе даже полезно иметь выступающие концы, удлиняющие зонд на 5–10% по сравнению с фрагментом ДНК – Это позволяет различать зонд и гибридный фрагмент дикого типа, получающийся при РНКазном расщеплении. Кроме того, выступающие концы дают возможность проверить активность РНКазы: если фермент инактивирован или активность его недостаточна, то не происходит их эффективного удаления и они обнаруживаются при радиоавтографии.

Это интересно:

Росолист
Росолист (Dr osophyllum lusitanicum L.) — одно из наиболее замечательных насекомоядных растений, произрастающее в Португалии и в Марокко. Растение отличается от других насекомоядных (Drosera, Pinguicula) как своей внешностью, так в особен ...

Орудие лова предназначено для работы в мелководных районах на разреженных скоплениях рыбы.
Пиленгас обитает на глубинах, держится преимущественно у дна, поэтому для облова достаточно высоты невода в посадке 15-16м. Для сравнения, высота кошелькового невода составляет 70-80м. При одинаковом расходе сетематериалов длина закидного ...

Продуктивность Азовского моря
Физико-географические условия Азовского моря дают основания утверждать о существовании в нем больших запасов рыбы. Еще сравнительно недавно рыбные запасы моря, несмотря на малые размеры и мелководье, были необычайно велики, о чем свидетел ...