Основное внимание уделено экспериментальным особенностям каждой стадии процесса РНКазного расщепления, включая получение меченого РНК-зонда. Большинство этапов аналогично описываемым в оригинальных работах, но приведены и некоторые модификации. Обсуждаются также возможные методические трудности и способы их преодоления.

Отметим, что для данного метода необязательно, чтобы концевые участки РНК-зонда и тестируемого образца ДНК были строго комплементарны. Выступающие некомплементарные 5'или З'-концы зонда не мешают анализу, так как они просто разрушаются РНКазой в процессе реакции расщепления. В принципе даже полезно иметь выступающие концы, удлиняющие зонд на 5–10% по сравнению с фрагментом ДНК – Это позволяет различать зонд и гибридный фрагмент дикого типа, получающийся при РНКазном расщеплении. Кроме того, выступающие концы дают возможность проверить активность РНКазы: если фермент инактивирован или активность его недостаточна, то не происходит их эффективного удаления и они обнаруживаются при радиоавтографии.


Это интересно:

Древнейшие предки человека.
Ученые выделяют три стадии антропогенеза: 1. Антропоидные предки человека. 2. Архантропы и палеоантропы (древнейшие и древние люди). 3. Люди современного морфологического типа. ...

Болезнетворные факторы
Классификация болезнетворных факторов окружающей среды. Патогенное воздействие низкого барометрического давления. Особенности патогенеза горной и высотной болезни. Классификация болезнетворных факторов окружающей среды. Выделяют 5 (пят ...

Гипотезы о географии возникновения Homo sapiens
Обычно появление Homo sapiens в Европе связывают с афро-азиатскими миграциями. На возможность миграции древних африканских гоминид в Азию, а затем в Европу указывает сходство зубной системы африканских находок, синантропа и предшественник ...