Выделение митопластов из митохондрий печени крыс
Для одного выделения обычно декапитировали 10 крыс, у которых извлекали печень.
Печень измельчали в специальном прессе, затем гомогенизировали в десятикратном объеме 300 мМ раствора сахарозы в 10 мМ Tris-HCl, рН 7.4 с использованием автоматического гомогенизатора при 240 об/мин.
Далее гомогенат центрифугировали на центрифуге К-70: 4 мин при 1200 об/мин (400g), затем 6 мин при 1500 об/мин (600g). В этих условиях осаждаются ядра и мембранные структуры.
Супернатант центрифугировали на РС-6 20 мин при 4800 об/мин (3500g). В этих условиях осаждается митохондриальная фракция. Осадок собирали и промывали в 300 мМ раствора сахарозы в 10 мМ Tris-HCl рН 7.4, затем ресуспендировали.
Повторное центрифугирование проводили на РС-6 20 мин. при 4800 об/мин (3500g). Осадок собирали, мерили его объем.
Доводили полученные митохондрии Tris-HCl (10 мМ, pH 7.4) до 500 мл.
Оставляли при перемешивании и температуре 4°С на 30 мин. В результате получались митопласты.
Митопласты центрифугировали при 5500 об/мин на РС-6 (4000g) в течение 20 мин.
Осадок объединяли. Измеряли его объем и концентрацию белка. Концентрацию белка измеряли спектрофотометрически (длина волны 750 нм) по методу Лоури (Лоури, 1965). Исходя из полученных данных, митопласты разводили бидистиллированной водой до концентрации 44 мг/мл.
Это интересно:
Экология млекопитающих
Условия существования и общее распространение.
Прямым доказательством биологического прогресса млекопитающих является широта их географического и биотопического распространения. Млекопитающие встречаются на земном шаре практически повсем ...
Приспособление плоских и круглых червей к паразитическому образу жизни
Плоские черви
: имеется кутикула, которая защищает от переваривания; они имеют крючки, присоски для удерживания; огромная плодовитость; обоеполые животные; имеют аэробный тип дыхания; развитие происходит со сменой хозяина; пищеварительная ...
Список сокращенных названий
АСТ –
аспартатаминотрансфераза
АЛТ –
аланиаминотрансфераза
ПДК –
предельно допустимая концентрация
ВОЗ –
Всемирная организация здравоохранения
ПОЛ –
перекисное окисление липидов
АМ –
альвеолярные макрофаги
ПНЛ –
полиморфонукл ...