Буфер «А» (Tris 50 mM, EDTA 0.5 mM pH 7.4; 125 мкл 2-меркаптоэтанола на 250 мл буфера после доведения рН)

Буфер «Б» (1М КСl в буфере «А»). Из него готовили ступенчатый градиент: 50, 100, 150, 200, 250, 300, 500 мМ КСl.

Взвешивалили DEAE-целлюлозу из расчета 1 г целлюлозы на 1 мл колонки. Целлюлозу промывали три раза деионизированной водой, затем буфером «А». Наносили на колонку. Промывали буфером «А» после нанесения.

Супернатант наносили на колонку c DEAE-целлюлозой (высота 2 см, объем 2 мл), предварительно уравновешенную буфером «А». После нанесения белков колонку промывали двойным объемом буфера «А» (Tris 50 мM, EDTA 0.5 мM pH 7.4).

Белки элюировали градиентом KCl: 50, 100, 150, 200, 250, 300, 500 мМ. Собирали по две фракции каждой концентрации соли. Каждая фракция по 2 мл. Полученные фракции проверяли на электрофорезе в ПААГ.

Это интересно:

Эволюция кровеносной системы позвоночных
Кровеносная система замкнутая. Она состоит из сердца, артериальных сосудов, венозных сосудов, капилляров (соединяет окончания разветвлений артерий и вен). Кровь позвоночных представляет собой бесцветную вязкую жидкость-плазму, в которой в ...

Постэмбриональное развитие сазана
Этап развития А. Через 5 дней после нереста в пруду появляется молодь сазана на этапе А. На этом этапе сазан имеет большой желточный мешок грушевидной формы. Голова слегка пригнута к желточному мешку. Рот нижний, открытый, неподвижный. Г ...

Физиологическая роль азота, круговорот азота в атмосфере
Азот – биоэлемент, структурная единица органических соединений, участвует в построении организмов и обеспечении их жизнедеятельности. Входит в состав важнейших биополимеров: белков, нуклеиновых кислот (ДНК, РНК); некоторых витаминов и г ...