Ионообменная хроматография на DEAE-целлюлозе

Буфер «А» (Tris 50 mM, EDTA 0.5 mM pH 7.4; 125 мкл 2-меркаптоэтанола на 250 мл буфера после доведения рН)

Буфер «Б» (1М КСl в буфере «А»). Из него готовили ступенчатый градиент: 50, 100, 150, 200, 250, 300, 500 мМ КСl.

Взвешивалили DEAE-целлюлозу из расчета 1 г целлюлозы на 1 мл колонки. Целлюлозу промывали три раза деионизированной водой, затем буфером «А». Наносили на колонку. Промывали буфером «А» после нанесения.

Супернатант наносили на колонку c DEAE-целлюлозой (высота 2 см, объем 2 мл), предварительно уравновешенную буфером «А». После нанесения белков колонку промывали двойным объемом буфера «А» (Tris 50 мM, EDTA 0.5 мM pH 7.4).

Белки элюировали градиентом KCl: 50, 100, 150, 200, 250, 300, 500 мМ. Собирали по две фракции каждой концентрации соли. Каждая фракция по 2 мл. Полученные фракции проверяли на электрофорезе в ПААГ.


Это интересно:

Сон и его значение. Сновидения
Сон чрезвычайно важен для организма. Лишение сна губительно сказывается на здоровы человека. Сон восстанавливает работоспособность клеток мозга. Они накапливают необходимую энергию, тем самым подготавливая человека к активной дневной деят ...

Метафизический и диалектический методы познания природы. Эмпирические и теоретические методы
В экономической теории применяются два противоположных всеобщих метода – метафизика и диалектика. Метафизика рассматривает все явления разрозненно, в состоянии покоя и неизменности. Такой подход к изучению экономики допускается в тех слу ...

Волчье лыко - фанерофит
Вспомним, что фанерофиты - деревья и кустарники. Следовательно, волчье лыко не может считаться эфемероидом , поскольку его надземная часть не отмирает на зиму. Это первоцветное растение использует весеннее время для привлечения насекомых ...