Буфер «А» (Tris 50 mM, EDTA 0.5 mM pH 7.4; 125 мкл 2-меркаптоэтанола на 250 мл буфера после доведения рН)

Буфер «Б» (1М КСl в буфере «А»). Из него готовили ступенчатый градиент: 50, 100, 150, 200, 250, 300, 500 мМ КСl.

Взвешивалили DEAE-целлюлозу из расчета 1 г целлюлозы на 1 мл колонки. Целлюлозу промывали три раза деионизированной водой, затем буфером «А». Наносили на колонку. Промывали буфером «А» после нанесения.

Супернатант наносили на колонку c DEAE-целлюлозой (высота 2 см, объем 2 мл), предварительно уравновешенную буфером «А». После нанесения белков колонку промывали двойным объемом буфера «А» (Tris 50 мM, EDTA 0.5 мM pH 7.4).

Белки элюировали градиентом KCl: 50, 100, 150, 200, 250, 300, 500 мМ. Собирали по две фракции каждой концентрации соли. Каждая фракция по 2 мл. Полученные фракции проверяли на электрофорезе в ПААГ.

Это интересно:

Глюкоза
Относительное или полное отсутствие инсулина у больных диабетом приводит к тому, что концентрация глюкозы в крови превышает допустимые в норме узкие пределы (около 3,5-5 моль/л натощак). Около 20% диабетиков, которые в основном заболевают ...

Болезни, присущие людям с разными группами крови.
Представители I группы крови очень выносливы, их больше всего среди долгожителей. Люди этого типа значительно реже других страдают от неврозов и других нарушений нервной системы. У них часто встречаются такие заболевания: язва желудка и д ...

Приспособление птиц к полёту
Туловище обтекаемой яйцеобразной формы, тело покрыто перьевым покровом. Перья произошли от роговых чешуек пресмыкающихся. Перья: контурные (имеют стержень и опахало); кроющие на теле; рулевые на хвосте; пуховые (гл. стержень отсутствует); ...