Среда выделения (200 мл, рН 7.4): маннитол 210 мМ; сахароза 70 мМ; HEPES (N-2-гидроксиэтилперазин–N’-этансульфоновая кислота) 10 мМ. Среду разделяли на три части. В одну 37 мг ЭДТА на 100 мл среды, в другую 45 мкл 0,1 М ЭГТА на 100 мл среды. Третью (три миллилитра) оставляли без изменений.

Все процедуры проводили при 4 °С. Взвешенный физраствор предварительно охлаждали. Затем взвешивали вместе с печенью. Измельчали печень в прессе, затем гомогенизировали, разбавив средой с ЭДТА в девять раз.

Центрифугировали 4 мин при 250 g, затем 6 мин при 600 g. В результате этого осаждались ядра и обрывки мембран.

Супернатант центрифугировали 20 мин при 4500 g.

Осадок ресуспендировали в среде с ЭГТА и центрифугировали 20 мин при 4500 g.

Осадок ресуспендировали в среде без ЭГТА и без ЭДТА в соотношении 100 мкл среды на каждый грамм ткани и ставили в лед.

Это интересно:

Преодоление одиночества. Одиночество
Живущих одиноко пожилых людей сравнительно немного, меньше чем один на шестерых. Среди них женщин в три раза больше, чем мужчин. Такова ситуация и в Польше, и во многих других странах, и объясняется она ранней смертностью мужчин. По имеющ ...

Сущность гелиобиологии. А.Л. Чижевский – основатель гелиобиологии
Основатель гелиобиологии А.Л. Чижевский доказал зависимость всех биологических процессов на Земле от цикла колебаний солнечной активности (СА), составляющего около 11 лет. Начатые им исследования мы продолжили с использованием современных ...

Организмы
Строение и поведение организма в значительной мере определяется его генотипом, основу которого составляет набор хромосом. Каждая хромосома представляет собой свернутую молекулу ДНК, в структуре которой в зашифрованном виде хранится информ ...