Среда выделения (200 мл, рН 7.4): маннитол 210 мМ; сахароза 70 мМ; HEPES (N-2-гидроксиэтилперазин–N’-этансульфоновая кислота) 10 мМ. Среду разделяли на три части. В одну 37 мг ЭДТА на 100 мл среды, в другую 45 мкл 0,1 М ЭГТА на 100 мл среды. Третью (три миллилитра) оставляли без изменений.

Все процедуры проводили при 4 °С. Взвешенный физраствор предварительно охлаждали. Затем взвешивали вместе с печенью. Измельчали печень в прессе, затем гомогенизировали, разбавив средой с ЭДТА в девять раз.

Центрифугировали 4 мин при 250 g, затем 6 мин при 600 g. В результате этого осаждались ядра и обрывки мембран.

Супернатант центрифугировали 20 мин при 4500 g.

Осадок ресуспендировали в среде с ЭГТА и центрифугировали 20 мин при 4500 g.

Осадок ресуспендировали в среде без ЭГТА и без ЭДТА в соотношении 100 мкл среды на каждый грамм ткани и ставили в лед.


Это интересно:

Витамин B5
Витамин B5 (никотиновая кислота, никотина-мид, витамин РР, ниацинамид). Это группа водорастворимых соединений, включающих пиридинтрикарбоновую кислоту и ее производные. Суточная потребность взрослого человека – 15-20 мг. Он необходим в по ...

Сенсор спиртов
В бродильных производствах необходимо непрерывно определять концентрации метанола и этанола в культуральных средах. При использовании спиртов в качестве источника углерода для культивируемых микроорганизмов концентрация спиртов должна под ...

Назвать основные направления эволюции животного мира в палеозойскую, мезозойскую и кайнозойскую эры
Эра Период Направление эволюции Палеозойская Кембрийский Расцвет морских беспозвоночных: моллюсков, трилобитов Ордовикский Силурийский Появление первых позвоночных: многоножек, скорпионов, бескрылых на ...