Выделение митохондрий из печени крыс
Среда выделения (200 мл, рН 7.4): маннитол 210 мМ; сахароза 70 мМ; HEPES (N-2-гидроксиэтилперазин–N’-этансульфоновая кислота) 10 мМ. Среду разделяли на три части. В одну 37 мг ЭДТА на 100 мл среды, в другую 45 мкл 0,1 М ЭГТА на 100 мл среды. Третью (три миллилитра) оставляли без изменений.
Все процедуры проводили при 4 °С. Взвешенный физраствор предварительно охлаждали. Затем взвешивали вместе с печенью. Измельчали печень в прессе, затем гомогенизировали, разбавив средой с ЭДТА в девять раз.
Центрифугировали 4 мин при 250 g, затем 6 мин при 600 g. В результате этого осаждались ядра и обрывки мембран.
Супернатант центрифугировали 20 мин при 4500 g.
Осадок ресуспендировали в среде с ЭГТА и центрифугировали 20 мин при 4500 g.
Осадок ресуспендировали в среде без ЭГТА и без ЭДТА в соотношении 100 мкл среды на каждый грамм ткани и ставили в лед.
Это интересно:
Понятие и сущность клонирования
Одним из ярких примеров достижений ученых, с проблемностью которых человечеству ещё не раз придется столкнуться является клонирование.
Клонирование – это процесс, в ходе которого живое существо производится от единственной клетки, взятой ...
Собственное время
Собственное время – время, измеренное наблюдателем, движущимся вместе с часами.
При этом в соответствии со вторым постулатом СТО движение светового импульса должно происходить со скоростью света с, одинаковой во всех ИСО. ...
Приспособительный характер поведения
Для нормального существования в постоянно меняющейся внешней среде организму требуется вовремя изменять свое поведение, приспосабливая его к условиям текущего момента.
Умение управлять своим поведением, своевременно его менять, а иногда ...