Этот комплекс изучен наиболее полно из всех симпортных белков. Он кодируется lacY-геном, который является частью lac-оперона, и его часто называют lac-пермеазой. Ген lacY был клонирован и секвенирован, и из штамма-сверхпродуцента был выделен белок - продукт этого гена. Пермеазу можно изучать в цитоплазматических мембранных везикулах (кабакосомах), в интактных клетках или в реконструированных протеолипосомах. Судя по данным об аминокислотной последовательности, белок имеет мол. массу 46 500, хотя результаты электрофореза в полиакриламидном геле с ДСН дают другую величину. Почти не вызывает сомнения, что функциональной единицей в мембране является мономер, хотя некоторые данные свидетельствуют о существовании димерной формы пермеазы in vivo.

На основании данных об аминокислотной последовательности лактозопермеазы были построены модели, согласно которым этот белок имеет 12 или 14 трансмембранных α-спиралей. Это в основном согласуется со спектроскопическими данными, свидетельствующими о высоком содержании α-спиралей, и немногочисленными топологическими данными.

Кинетику транспорта с помощью пермеазы изучали, используя подходы:

1) выведение лактозы по градиенту или транспорт в везикулы (нуль с транс-стороны);

2) активный транспорт лактозы против градиента концентрации, сопряженный с протонным электрохимическим градиентом;

3) равновесный обмен;

4) противоток (бесконечность с цис-стороны).

1. Пермеаза имеет одно или более мест связывания для протона и одно - для лактозы. Эти места бывают поочередно обращены к периплазматической и цитоплазматической сторонам мембаны, и соответствующий конформационный переход является лимитирую щей стадией процесса. Максимальная скорость транспорта равна 25-50 с-1. При наличии трансмембранного протонного электрохимического потенциала (ДДН+) Км для лактозы составляет - 80 мкМ; место связывания протона, возможно, характеризуется высоким рКл, поэтому большую часть времени протонировано.

При ДДН+ = 0 значение Км для лактозы гораздо выше - 15-20 мМ.

2. Транспорт лактозы обязательно сопровождается транспортом Н+ со стехиометрией 1:

3. Конечным результатом транспорта является перенос через бислой положительного заряда. Следовательно, важную роль в установлении равновесия и скорости транспорта играют трансмембранный электрический потенциал и разность протонного химического потенциала.

Это интересно:

Определение ХС-ЛОНП (холестерина-липопротеидов очень низкой плотности) расчетным методом
Уровень ХС-ЛОНП находят путем деления показателя концентрации триацилглицеринов на 2,2 (ТГ/2,2). Вывод этой формулы расчетов базируется на том, что, во-первых, при отсутствии в крови хиломикронов (а они после 12-часового голодания у больш ...

Аналитические методы. Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация. Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных РСВ клетках
1. Оптимальные условия для мечения вирусных белков достигаются при добавлении к зараженным клеткам через 18 ч после заражения актиномицина D в концентрации 2,5 мкг/мл. Белки РСВ удается эффективно пометить смесью - Meтионина и - цистеина ...

Определение перекисного числа йодометрическим титрованием по ГОСТ 26593-85
Метод основан на окислении йодистого калия перекисями и гидроперекисями, содержащимися в образце, в растворе уксусной кислоты и хлороформа и титровании выделившегося йода раствором тиосульфата натрия. Пробу отвешивают в колбу или пробирк ...