Переносчики катионов плазматической мембраны (е1e2-типа): атр-зависимые ионные насосы
Страница 1

Материалы » Строение и принцип действия переносчиков » Переносчики катионов плазматической мембраны (е1e2-типа): атр-зависимые ионные насосы

Несколько про - и эукариотических ион-переносящих АТРаз составляют единое семейство и обладают сходными аминокислотными последовательностями и механизмами переноса ионов (табл.2).

Таблица 2.

Наиболее полно охарактеризованы Nа+ /К+-АТРаза из плазматической мембраны животных клеток и Са2+ - АТРаза из саркоплазматического ретикулума. Большинство ферментов этой группы представляют собой единый полипептид с мол. массой 100000; исключение составляет Na+/К+ - АТРаза, выделенная из нескольких источников, которая содержит вторую, меньшую субъединицу с неизвестной функцией. Эти переносчики ингибируются ванадатом и прямо фосфорилируются АТР с образованием фосфорилированного интермедиата, играющего важную роль в транспорте (см. рис.3).

Рис.3 Кинетическая схема для Na+ /К+ - АТРазы. Для Са2+ - АТРазы можно использовать тот же механизм, за исключением того, что вслед за лефосфорилированием Е2 - Р переносчик возвращается в конформацию E1 в незагруженном состоянии (пунктирная линия).

Катионные переносчики этой группы значительно различаются по ионной специфичности (см. табл.2). Неодинакова и стехиометрия транспорта. Например, Са2+ - АТРаза переносит 2Са2+/АТР в полость саркоплазматического ретикулума, в то время как Na+/К+ - АТРаза переносит 3Na+ наружу и 2К + в цитоплазму через плазматическую мембрану. При этом различия в работе АТРазы касаются не только стехиометрии и природы переносимых ионов, но также и того, что Са2+ - АТРаза способна переносить ионы лишь в одном направлении, в то время как Na+ /K+ - АТРаза делает это в обоих направлениях.

Название "фермент Е1E2-типа" было введено в работе, посвященной Na+/К+-АТРазе. Как показали исследования, этот белок существует по меньшей мере в двух различающихся конформациях, для которых характерны разное связывание субстратов и неодинаковая подверженность мягкому протеолизу. Форма Е1 соответствует конформации, в которой места связывания ионов обращены в сторону цитоплазмы (высокое сродство к Na+, низкое - к К+) и которая обладает высоким сродством к АТР. Места связывания ионов в фосфорилированной форме Е2 обращены наружу (высокое сродство к К +, низкое-к Na +). На рис.3 изображен транспортный цикл, в котором участвуют две ненагруженные формы переносчика и две нагруженные, Е2 (2К+) связи E1 (3Na+) связь со "спрятанными" внутри насосного комплекса ионами. Изучение связывания К+ фосфорилированной формой переносчика (Е2-Р) показало, что оно происходит в двух разных местах.

Основные особенности каталитического цикла.

1. E1-форма связывает три иона Na+ с цитоплазматической стороны мембраны и затем взаимодействует с АТР, образуя фосфорилированиый фермент. Фосфорилируется при этом специфический аспартат, консервативный в этой группе ферментов.

2. После отсоединения ADP ионы оказываются "спрятанными" внутри комплекса.

3. Фосфорилирование белка стабилизирует конформацию с низким сродством к Na+; при этом места связывания ионов обращены наружу. Это способствует переходу E1-P в E2-P, в результате которого и осуществляется перенос.

4. В форме Е2-Р места связывания ионов обращены во внеклеточную среду; эта конформация обладает высоким сродством к К+, который связывается, катализирует дефосфорилирование и остается "спрятанным" внутри комплекса. Обратите внимание, что Na+ необходим для быстрого фосфорилирования, а К+ - для быстрого дефосфорилирования. Ванадат связывается с формой Е2, возможно, как некий аналог переходного состояния фосфата. У других ферментов E1E2-типa, например Са2+ - АТРазы, форма Е2-Р дефосфорилируется и переходит в форму E1, которая в свою очередь переходит в незагруженную форму.

5. Лимитирующей стадией каталитического цикла является, по всей вероятности, освобождение К+ и переход его из связанного с ферментом состояния в свободное. Этот процесс стимулируется связыванием АТРс сайтом, обладающим низким сродством.

Следовательно, АТР выполняет две разные функции, выступая в качестве субстрата и аллостерического эффектора. Сколько мест связывания АТР имеет фермент, пока неясно.

Определена аминокислотная последовательность нескольких АТРаз E1E2-типа, включая Na+/К+ - АТРазу (а-субъединица) из нескольких источников, Са2+ - АТРазу, Н+ - АТРазу из плазматической мембраны дрожжей и Neurospora crassa и К+ - АТРазу из S. faecalis. Исходя из профилей гидрофобности, были построены модели, согласно которым эти белковые комплексы содержат 6, 8 или 10 трансмембранных α-спиральных сегментов (рис.4).

Страницы: 1 2


Это интересно:

Транспортировка икры, личинок, молоди и взрослых особей выбранного объекта
Растительноядных рыб перевозят в живорыбных вагонах и автомашинах и чаще всего в полиэтиленовых пакетах авто – и авиатранспортом (рис.4.). Рис. 4. Полиэтиленовый пакет для перевозки живой рыбы Посадочный материал укладывают в фанерные ...

Особенности микроскопических грибов, выделенных из различных экониш. Влияние экологических условий на рост микромицетов. Сравнительный анализ скорости радиального роста микромицетов, выделенных из
На сегодня экологические проблемы становятся не менее актуальными, чем запросы микробиологической промышленности (Кочкина, 1978; Великанов, 1983; Жданова, 1982-2000; Паников, 1991). Надежды на их решение связывают с так называемым системн ...

Статистическая обработка результатов
Статистический анализ осуществлялся с помощью программы Statistica 7 с использованием t-критерия Стьюдента. Различие считалось достоверным при уровне значимости Р<0,05. Все исследования выполнены в лаборатории функциональной биохимии ...