Аналитические методы. Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация. Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных РСВ клетках
1. Оптимальные условия для мечения вирусных белков достигаются при добавлении к зараженным клеткам через 18 ч после заражения актиномицина D в концентрации 2,5 мкг/мл.
Белки РСВ удается эффективно пометить смесью - Meтионина и - цистеина по следующей методике.
2. Через 2 ч после внесения актиномицина D культур ал ьную среду заменяют на среду, содержащую 50 мкКи/мл L--Meтионина и 25 мкКи/мл Ь--цистеина. у
3. Клетки инкубируют 16 ч при 37 °С или до проявления выраженного ЦПД.
4. Монослой промывают, солюбилизируют клетки и экстрагируют белки лизирующим буфером.
5. После инкубации в течение 2 ч при комнатной температуре лизат используют для электрофореза или хранят при - 20 °С.
Рис.4 иллюстрирует результаты разделения меченных - метионином белков РСВ в пластине 10% -ного полиакриламидного геля. Вирусные гликопротеины можно пометить аналогичным методом, используя в качестве метки 50 мкКи/мл - глюкозамина или - маннозы. Альтернативный метод введения метки в гликопротеины оболочки РСВ заключается в йодировании поверхности зараженных вирусом клеток лактопероксидазным методом. Белки очищенного нуклеокапсида РСВ можно йодировать с помощью хлорамина Т.
Это интересно:
Перекисное окисление липидов в митохондриях
Несмотря на доказанную универсальность механизма ПОЛ в биологических мембранах, обнаружены некоторые отличия этого процесса в разных клеточных органеллах.
По мнению Ю.А. Владимирова и А.И. Арчакова, они обусловлены в основном особенностя ...
Экологизац с\х
Напр-на на охр прир комплекса. Прир-охр меропр: научные, технич, технологич, организационн, правов, пропагандистск, образовательн. Это: 1) Сохр и созд зел насажд, стр-во очистн. сооруж, соверш-ние технопр-сов, регулир. движ. автотр-та. 2) ...
Выводы и обобщения
Экскурсии по учетам птиц проводились: по ул. Ленина (от школы до ул. Красноармейской); по ул. Володарского (от ГДП «Аполло» до ул. Труда); в Александровском парке, городском детском паре и овраге «Засора»; на побережье р. Вятки, в Заречно ...