1. Оптимальные условия для мечения вирусных белков достигаются при добавлении к зараженным клеткам через 18 ч после заражения актиномицина D в концентрации 2,5 мкг/мл.

Белки РСВ удается эффективно пометить смесью - Meтионина и - цистеина по следующей методике.

2. Через 2 ч после внесения актиномицина D культур ал ьную среду заменяют на среду, содержащую 50 мкКи/мл L--Meтионина и 25 мкКи/мл Ь--цистеина. у

3. Клетки инкубируют 16 ч при 37 °С или до проявления выраженного ЦПД.

4. Монослой промывают, солюбилизируют клетки и экстрагируют белки лизирующим буфером.

5. После инкубации в течение 2 ч при комнатной температуре лизат используют для электрофореза или хранят при - 20 °С.

Рис.4 иллюстрирует результаты разделения меченных - метионином белков РСВ в пластине 10% -ного полиакриламидного геля. Вирусные гликопротеины можно пометить аналогичным методом, используя в качестве метки 50 мкКи/мл - глюкозамина или - маннозы. Альтернативный метод введения метки в гликопротеины оболочки РСВ заключается в йодировании поверхности зараженных вирусом клеток лактопероксидазным методом. Белки очищенного нуклеокапсида РСВ можно йодировать с помощью хлорамина Т.

Это интересно:

Входящие, исходящие пути и послойная организация коры
Основной особенностью коры млекопитающих является то, что клетки здесь расположены в виде 6 слоев в пределах серого вещества (рис. 6А). Слои сильно различаются по внешнему виду, в зависимости от плотности расположения клеток, а также толщ ...

Признание открытий Менделя
Великие открытия часто признаются не сразу. Хотя труды Общества, где была опубликована статья Менделя, поступили в 120 научных библиотек, а Мендель дополнительно разослал 40 оттисков, его работа имела лишь один благосклонный отклик - от К ...

Коллекция листьев поврежденных насекомыми
Задание №3 - собрать коллекцию листьев поврежденных насекомыми: галлы, погрызы, повреждения листовертками. Листовертка - мелкая молевидная бабочка, размах крыльев не больше 2,5 см, с довольно толстым телом, покрытым густыми волосками, с ...