Аналитические методы. Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация. Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных РСВ клетках
1. Оптимальные условия для мечения вирусных белков достигаются при добавлении к зараженным клеткам через 18 ч после заражения актиномицина D в концентрации 2,5 мкг/мл.
Белки РСВ удается эффективно пометить смесью - Meтионина и - цистеина по следующей методике.
2. Через 2 ч после внесения актиномицина D культур ал ьную среду заменяют на среду, содержащую 50 мкКи/мл L--Meтионина и 25 мкКи/мл Ь--цистеина. у
3. Клетки инкубируют 16 ч при 37 °С или до проявления выраженного ЦПД.
4. Монослой промывают, солюбилизируют клетки и экстрагируют белки лизирующим буфером.
5. После инкубации в течение 2 ч при комнатной температуре лизат используют для электрофореза или хранят при - 20 °С.
Рис.4 иллюстрирует результаты разделения меченных - метионином белков РСВ в пластине 10% -ного полиакриламидного геля. Вирусные гликопротеины можно пометить аналогичным методом, используя в качестве метки 50 мкКи/мл - глюкозамина или - маннозы. Альтернативный метод введения метки в гликопротеины оболочки РСВ заключается в йодировании поверхности зараженных вирусом клеток лактопероксидазным методом. Белки очищенного нуклеокапсида РСВ можно йодировать с помощью хлорамина Т.
Это интересно:
Приспособление птиц к полёту
Туловище обтекаемой яйцеобразной формы, тело покрыто перьевым покровом. Перья произошли от роговых чешуек пресмыкающихся. Перья: контурные (имеют стержень и опахало); кроющие на теле; рулевые на хвосте; пуховые (гл. стержень отсутствует); ...
Единая теория Вселенной или теория всего
Единая теория Вселенной, или Теория всего - гипотетическая объединенная физико-математическая теория, описывающая все известные фундаментальные взаимодействия. Первоначально данный термин использовался в ироническом ключе для обозначения ...
Активность каталазы в плацентарной ткани в норме и при хронической
внутриутробной гипоксии плода
Результаты исследования показали достоверное понижение активности каталазы в плацентарной ткани при хронической внутриутробной гипоксии плода в 1,46 раза по отношению к норме (рис. 4).
Рис. 4. Активность каталазы в плаценте в норме и п ...