Аналитические методы. Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация. Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных РСВ клетках
1. Оптимальные условия для мечения вирусных белков достигаются при добавлении к зараженным клеткам через 18 ч после заражения актиномицина D в концентрации 2,5 мкг/мл.
Белки РСВ удается эффективно пометить смесью - Meтионина и - цистеина по следующей методике.
2. Через 2 ч после внесения актиномицина D культур ал ьную среду заменяют на среду, содержащую 50 мкКи/мл L--Meтионина и 25 мкКи/мл Ь--цистеина. у
3. Клетки инкубируют 16 ч при 37 °С или до проявления выраженного ЦПД.
4. Монослой промывают, солюбилизируют клетки и экстрагируют белки лизирующим буфером.
5. После инкубации в течение 2 ч при комнатной температуре лизат используют для электрофореза или хранят при - 20 °С.
Рис.4 иллюстрирует результаты разделения меченных - метионином белков РСВ в пластине 10% -ного полиакриламидного геля. Вирусные гликопротеины можно пометить аналогичным методом, используя в качестве метки 50 мкКи/мл - глюкозамина или - маннозы. Альтернативный метод введения метки в гликопротеины оболочки РСВ заключается в йодировании поверхности зараженных вирусом клеток лактопероксидазным методом. Белки очищенного нуклеокапсида РСВ можно йодировать с помощью хлорамина Т.
Это интересно:
Биохимические методы исследования. Определение содержания белка
Концентрацию белка определяли по методу Бредфорд [ 16 ]. К 10 мкл супернатанта в оптимальном разведении добавляли 500 мкл 0.01% раствора красителя Кумасси ярко синего G-250 и инкубировали 15 мин при комнатной температуре. После этого изме ...
Жирянка–липучка
В поймах рек, на сфагновых болотах, на сырых лугах и по берегам мелководных озер встречаются необычные растения с толстыми мясистыми прикорневыми листьями. Если прикоснуться к ним пальцем, то чувствуешь что они липкие. Это жирянки. С помо ...
Определение устойчивости к гипоксии крыс и адаптация к ней
низкоустойчивых крыс
Группу самцов линии Вистар, поместив в барокамеру и снизив давление до 22 кПа, подвергли острой гипобарической гипоксии, соответствующей подъему на высоту 11500 м. Те животные, что выдерживали гипоксию в течение 10-15 минут, считались выс ...