Интактную вирионную РНК РСВ получить трудно; рекомендуется следующая методика.

Очищенный радиоактивно меченный вирус получают, РНК экстрагируют фенолом и далее из водной фазы осаждают этанолом.

Выделенную РНК очищают центрифугированием в 15 - 30% -ном градиенте концентрации сахарозы в присутствии ДДС-Na в течение 15 ч при 19 000 об/мин.

Альтернативный подход состоит в том, что РНК, экстрагированную из немеченых вирионов, метят по З'-концу с помощью РНК-лигазы и - цитидин-3/,5'-бисфосфата, как описано Вертц и Дэвисом. РНК можно пометить и по 5'-концу после удаления 5'-концевого фосфата щелочной фосфатазой из кишечника крупного рогатого скота, которую затем инактивируют протеиназой К. После этого РНК экстрагируют фенолом, осаждают этанолом и метят в присутствии - ATP и полинуклеотидкиназы из Е. coli, зараженной бактериофагом Т4. Меченую РНК затем отделяют от непрореагировавшего АТР хроматографией на колонке с сефадексом G50. Методика, удобная для мечения РНК РСВ, описана Шубертом и др. .

Это интересно:

Витамин C
Витамин С (аскорбиновая кислота). Хорошо растворяется в воде, при обычной кулинарной обработке продуктов сильно разрушается. Также легко разрушается под воздействием света, солнечных лучей, высокой температуры, от соприкосновения с металл ...

Основа организации и устойчивости биосферы
Термин "биосфера" был введен для обозначения общего облика поверхности Земли, обусловленного наличием на ней всей массы живых организмов. Два главных компонента биосферы — живые организмы и среда их обитания (включая нижние слои ...

Витамин B3
Витамин В3 (пантотеновая кислота, пантотенат кальция). Участвует в составе кофермента А в обмене липидов, углеводов, белков и других процессах метаболизма. Суточная потребность взрослого человека – 5-10 мг. В нормальных условиях потребнос ...