Радиоактивное мечение вирионной РНК

Материалы » Группа пневмовирусов » Радиоактивное мечение вирионной РНК

Интактную вирионную РНК РСВ получить трудно; рекомендуется следующая методика.

Очищенный радиоактивно меченный вирус получают, РНК экстрагируют фенолом и далее из водной фазы осаждают этанолом.

Выделенную РНК очищают центрифугированием в 15 - 30% -ном градиенте концентрации сахарозы в присутствии ДДС-Na в течение 15 ч при 19 000 об/мин.

Альтернативный подход состоит в том, что РНК, экстрагированную из немеченых вирионов, метят по З'-концу с помощью РНК-лигазы и - цитидин-3/,5'-бисфосфата, как описано Вертц и Дэвисом. РНК можно пометить и по 5'-концу после удаления 5'-концевого фосфата щелочной фосфатазой из кишечника крупного рогатого скота, которую затем инактивируют протеиназой К. После этого РНК экстрагируют фенолом, осаждают этанолом и метят в присутствии - ATP и полинуклеотидкиназы из Е. coli, зараженной бактериофагом Т4. Меченую РНК затем отделяют от непрореагировавшего АТР хроматографией на колонке с сефадексом G50. Методика, удобная для мечения РНК РСВ, описана Шубертом и др. .


Это интересно:

Темпераменты.
У учеников с группой крови системы 0αβ(I) наиболее часто встречаются такие темпераменты, как сангвиник и флегматик. Это лишний раз подтверждает энергичность, работоспособность, активность людей с I группой крови. Легко сходятся ...

Вегетативная нервная система
Вегетативная нервная система отвечает за регулирование функций внутренних органов и желез, включая сердце, желудок, почки и поджелудочную железу. Соматическая нервная система состоит из двух основных компонентов - сенсорной и моторной сис ...

Способов видеть много — все зависит от целей
Каждый вид в результате эволюции развил свои зрительные способности настолько, на­сколько это требуется для его среды обитания и образа жизни. Если понимать это, можно ска­зать, что у всех живых организмов зрение по-своему «идеальное». ...