Радиоактивное мечение вирионной РНК
Интактную вирионную РНК РСВ получить трудно; рекомендуется следующая методика.
Очищенный радиоактивно меченный вирус получают, РНК экстрагируют фенолом и далее из водной фазы осаждают этанолом.
Выделенную РНК очищают центрифугированием в 15 - 30% -ном градиенте концентрации сахарозы в присутствии ДДС-Na в течение 15 ч при 19 000 об/мин.
Альтернативный подход состоит в том, что РНК, экстрагированную из немеченых вирионов, метят по З'-концу с помощью РНК-лигазы и - цитидин-3/,5'-бисфосфата, как описано Вертц и Дэвисом. РНК можно пометить и по 5'-концу после удаления 5'-концевого фосфата щелочной фосфатазой из кишечника крупного рогатого скота, которую затем инактивируют протеиназой К. После этого РНК экстрагируют фенолом, осаждают этанолом и метят в присутствии - ATP и полинуклеотидкиназы из Е. coli, зараженной бактериофагом Т4. Меченую РНК затем отделяют от непрореагировавшего АТР хроматографией на колонке с сефадексом G50. Методика, удобная для мечения РНК РСВ, описана Шубертом и др. .
Это интересно:
Практическая работа «влияние рекреационной нагрузки
на структуру почвы»
Цель: оценить влияние рекреационной нагрузки на структуру почвы.
Введение: Под рекреационной нагрузкой подразумевают комплексное воздействие отдыхающих людей на природные экосистемы.
Вытаптывание – основной процесс нарушения природной с ...
Сравнить строение пищеварительной, выделительной и нервной
систем у круглых, кольчатых червей и членистоногих. Выделить ароморфозы
кольчатых червей и членистоногих
Сравнение строения систем организма у трех типов животных.
Система организма
Тип животных
Круглые черви
Кольчатые черви
Членистоногие
Пищеварительная
Отделы: передний, средний и задний.
Начинается ротовым и зака ...
Глиоксилатный цикл. Механизмы регуляции цикла. Энергетическая эффективность
процесса, значение
Этот цикл в 1957 г. был впервые описан у бактерий и плесневых грибов Г. Л. Корнбергом и Г. А. Кребсом. Затем оказалось; что он активно функционирует в про- растающих семенах масличных растений и в других растительных объектах, где запасны ...