Капсидный белок выделяют из очищенных нуклеокапсидов, которые в свою очередь можно получить либо из вирионов, либо из экстракта зараженных клеток. Ниже приведена методика выделения из клеточных экстрактов, дающая более высокий выход.

50-Ю6 клеток заражают РСВ. Через 36-48 ч после заражения клетки снимают с поверхности флакона раствором, содержащим 10 мМ трис-НО, рН 7,4, 0,18 М NaCl, 0,25 мМ ЭДТА и 0,1 мМ PMSF. Клетки осаждают центрифугированием и ресуспендируют в 1мл лизирующего буфера 20 мин при 4°С. Клетки разрушают в гомогенизаторе Даунса. К гомогенату добавляют NaCl до концентрации 0,1 М и удаляют неразрушенные клетки, ядра и дебрис центрифугированием 2 мин при 600 g. Нуклеокапсиды осаждают центрифугированием 30 мин при 100000 g. Нуклеокапсиды промывают лизирующим буфером, а затем буфером, содержащим 10 мМ трис-HCl, рН 7,4, и 0,1 мМ ЭДТА. Осадок нуклеокапсидов ресуспендируют и получают очищенные нуклеокапсиды изопикническим центрифугированием в 15-55% -ном градиенте концентрации тартрата калия в буфере ТЕ.

Это интересно:

Насекомые и история жизни на земле. Древние крылатые насекомые
Миссисипский и пенсильванский периоды. В верхнедевонских и миссисипских отложениях ископаемых насекомых до сих пор найдено не было. Однако быстрая эволюция амфибий с разделением их на четыре отряда в течение миссисипского периода могла б ...

Световой день и биоритмы
Циркадные ритмы "придуманы" природой, чтобы приспособить организм к чередованию светлого и темного времени суток и поэтому не могут не быть связаны с восприятием света. Информация о световом дне поступает в супрахиазматическое я ...

Биохимические методы исследования. Определение содержания белка
Концентрацию белка определяли по методу Бредфорд [ 16 ]. К 10 мкл супернатанта в оптимальном разведении добавляли 500 мкл 0.01% раствора красителя Кумасси ярко синего G-250 и инкубировали 15 мин при комнатной температуре. После этого изме ...