Очистка капсидного белка

Материалы » Группа пневмовирусов » Очистка капсидного белка

Капсидный белок выделяют из очищенных нуклеокапсидов, которые в свою очередь можно получить либо из вирионов, либо из экстракта зараженных клеток. Ниже приведена методика выделения из клеточных экстрактов, дающая более высокий выход.

50-Ю6 клеток заражают РСВ. Через 36-48 ч после заражения клетки снимают с поверхности флакона раствором, содержащим 10 мМ трис-НО, рН 7,4, 0,18 М NaCl, 0,25 мМ ЭДТА и 0,1 мМ PMSF. Клетки осаждают центрифугированием и ресуспендируют в 1мл лизирующего буфера 20 мин при 4°С. Клетки разрушают в гомогенизаторе Даунса. К гомогенату добавляют NaCl до концентрации 0,1 М и удаляют неразрушенные клетки, ядра и дебрис центрифугированием 2 мин при 600 g. Нуклеокапсиды осаждают центрифугированием 30 мин при 100000 g. Нуклеокапсиды промывают лизирующим буфером, а затем буфером, содержащим 10 мМ трис-HCl, рН 7,4, и 0,1 мМ ЭДТА. Осадок нуклеокапсидов ресуспендируют и получают очищенные нуклеокапсиды изопикническим центрифугированием в 15-55% -ном градиенте концентрации тартрата калия в буфере ТЕ.


Это интересно:

Обзор литературы. Рыбоводно-биологическая характеристика объектов исследования
Линь (Tinca tinca L.). Эта относительно теплолюбивая донная рыба известна в Малой Азии, на Кавказе, в Сибири, вплоть до Енисея, и по всей Европе, за исключением Скандинавских стран и Кольского полуострова [36]. В Калининградской области н ...

Органические вещества, входящие в состав клетки: углеводы, их классификация и функции
Углеводы, или сахариды – органические вещества. У большинства углеводов число атомов водорода вдвое превышает количество атомов кислорода. Поэтому эти вещества и были названы углеводами. В животной клетке углеводы находятся в количествах, ...

Культивирование съедобных грибов на жидких средах
Известен способ получения посевного мицелия съедобных грибов, включающий выращивание посевного мицелия на зерновой питательной среде с добавлением селената натрия, который вносят в качестве стимулятора роста. Данный способ предусматривает ...