Моноклональные антитела к нескольким белкам РСВ были получены стандартными методами. Ниже приведен типичный протокол.

1. Мышам линии Balb/c внутрибрюшинно вводят зараженные РСВ клетки. Через 10 сут. инокуляцию повторяют.

2. Селезенки иммунизированных мышей суспендируют в среде RPM1 1640, забуференной бикарбонатом натрия и содержащей пенициллин, гентамицин, пируват натрия, L-глютамин и ЭТС.

3. Клетки селезенки иммунизированных мышей сливают с клетками мышиной миеломы, например Balb/c NS1/1, выращиваемой в той же среде. При этом смешивают 3-107 клеток селезенки с таким же количеством клеток миеломы. Клетки центрифугируют 10 мин при 200 g и 1 мин выдерживают при 37 °С. Для слияния клеток по каплям добавляют 1 мл 50% -ного ПЭГ 4000 с 5% ДМСО.

4. Суспензию инкубируют 90 с при 37 °С и останавливают процесс слияния, добавляя 20 мл среды.

5. Клетки осаждают центрифугированием и промывают средой. Осадок ресуспендируют в среде ГАТ и распределяют по плоскодонным лункам планшета для иммунологических реакций.

6. Клетки инкубируют на питательном слое из макрофагов, подготовленном за сутки до слияния; каждая лунка должна содержать 10" перитонеальных макрофагов здоровой мыши.

7. Через 6 сут после начала инкубации в каждую лунку вносят по 50 мкл среды ГАТ.

8. Через 9-12 сут после слияния проверяют активность и специфичность продуцируемых антител методом ELISA с антигенами РСВ.

9. Гибридомы, продуцирующие специфические антитела, клонируют методом предельного разведения в планшете для иммунологических реакций, используя макрофаги или клетки селезенки в качестве фидера. Клонирование проводят дважды. Гибридомы считают стабильными, если 95% клонов продуцируют специфические антитела.

Это интересно:

Переносчик глюкозы из мембраны эритроцита
Этот переносчик охарактеризован наиболее полно из всех белков, катализирующих диффузию единственного вещества через мембрану. Он переносит через эритроцитарную мембрану D-глюкозу, которая затем используется при гликолизе. Такие же или ана ...

Современная (эволюционная) естественнонаучная картина мира
В XIXв обнаружена несостоятельность научной картины мира, термодинамика провозгласила парадоксальный вывод: «если бы мир был гигантской машиной, то такая машина, должна была остановиться, так как должна остановиться, т.к. запас полезной э ...

Современная генетика
Если век XIX по праву вошел в историю мировой цивилизации как Век Физики, то стремительно завершающемуся веку XX-му, в котором нам счастливилось жить, по всей вероятности, уготовано место Века Биологии, а может быть, и Века Генетики. Сер ...