Моноклональные антитела к нескольким белкам РСВ были получены стандартными методами. Ниже приведен типичный протокол.

1. Мышам линии Balb/c внутрибрюшинно вводят зараженные РСВ клетки. Через 10 сут. инокуляцию повторяют.

2. Селезенки иммунизированных мышей суспендируют в среде RPM1 1640, забуференной бикарбонатом натрия и содержащей пенициллин, гентамицин, пируват натрия, L-глютамин и ЭТС.

3. Клетки селезенки иммунизированных мышей сливают с клетками мышиной миеломы, например Balb/c NS1/1, выращиваемой в той же среде. При этом смешивают 3-107 клеток селезенки с таким же количеством клеток миеломы. Клетки центрифугируют 10 мин при 200 g и 1 мин выдерживают при 37 °С. Для слияния клеток по каплям добавляют 1 мл 50% -ного ПЭГ 4000 с 5% ДМСО.

4. Суспензию инкубируют 90 с при 37 °С и останавливают процесс слияния, добавляя 20 мл среды.

5. Клетки осаждают центрифугированием и промывают средой. Осадок ресуспендируют в среде ГАТ и распределяют по плоскодонным лункам планшета для иммунологических реакций.

6. Клетки инкубируют на питательном слое из макрофагов, подготовленном за сутки до слияния; каждая лунка должна содержать 10" перитонеальных макрофагов здоровой мыши.

7. Через 6 сут после начала инкубации в каждую лунку вносят по 50 мкл среды ГАТ.

8. Через 9-12 сут после слияния проверяют активность и специфичность продуцируемых антител методом ELISA с антигенами РСВ.

9. Гибридомы, продуцирующие специфические антитела, клонируют методом предельного разведения в планшете для иммунологических реакций, используя макрофаги или клетки селезенки в качестве фидера. Клонирование проводят дважды. Гибридомы считают стабильными, если 95% клонов продуцируют специфические антитела.

Это интересно:

Радиальная скорость грибов на модельных субстратах
В таблице приложения и на рисунках 1–2 приведены зависимости радиальной скорости роста от времени у изученных грибов на модельных источниках углерода. лактоза ксилоза арабиноза галактоза мальтоза Рис. 1. ...

Интенсивный способ выращивания вешенки
Интенсивный метод выращивания вешенки был разработан венгерскими учеными и усовершенствован российскими исследователями. Данным способом вешенку выращивают на определенном субстрате в закрытом помещении в регулируемых условиях. Цикл разви ...

Сезонные явления в жизни рыб семейства кефалевых
У рыб на протяжении года наблюдаются следующие сезонные явления: нерест, посленерестовый нагул и зимовка. Во время нереста* рыбы отыскивают места, где можно отложить икру и где имеются условия для развития потомства – нерестилища. Рыбы ...