Фиксировали и окрашивали мазки способом окраски по Паппенгейму. Предметные стекла ставили в киевский аппарат для массовой окраски мазков и заливали красителем-фиксатором Мая-Грюнвальда. Через 3 мин его заменяли рабочим красителем Романовского. Продолжали окрашивание в течение 15 мин, после чего краситель сливали, а мазки промывали водопроводной водой. Потом стекла ставили под углом для высушивания [57].

Определяли следующие показатели крови: концентрацию гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, общего белка в сыворотке крови, лейкоцитарную формулу, цитометрические характеристики эритроцитов.

Подсчет эритроцитов и лейкоцитов проводился с помощью камеры Горяева. Эритроциты считали в 5 больших квадратах камеры, а лейкоциты будут подсчитаны косвенным методом. Определяемую величину получали по формуле (1).

Х = , (1)

где Х- число клеток в 1 мкл крови; а – количество подсчитанных клеток; y – степень разведения крови; n – количество малых квадратов.

для эритроцитов:

Хэ = = а*12500;

для лейкоцитов:

Хл = = а*2500 [53].

Для определения гемоглобина использовали гемиглобинцианидный метод на ФЭК с использованием ацетонциангидрина. Расчет содержания гемоглобина будет проводиться по формуле (2):

Hb, г/л = , (2)

где Еоп – экстинция опытной пробы; Ест – экстинция стандартного раствора; С – концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе (59,75 мг%); К – коэффициент разведения крови; 0,01 – коэффициент для пресчета концентрации гемоглобина из мг в г*л -1 [53].

Концентрацию белка крови рыб определяют с помощью коэффициента преломления сыворотки на рефрактометре. Коэффициент преломления довольно точно свидетельствует о количественном содержании в сыворотке белка, которое определяется по таблице [53].

Концентрацию общего белка в сыворотке крови (в г*л -1) определяют по графику, используя найденный коэффициент преломления [53].

Подсчет лейкоцитарной формулы крови на окрашенных препаратах проводили с использованием светового микроскопа с применением иммерсии (увеличение 90х15, 100х15). На мазках подсчитывали 200 лейкоцитов по общепринятой методике. При идентификации лейкоцитов использовали классификацию клеток крови рыб Н.Т. Ивановой (1983). Подсчет лейкоцитарной формулы проводился по следующим группам лейкоцитов: нейтрофилы, среди которых выделяли: миелоциты нейтрофильные, метамиелоциты нейтрофильные, палочкоядерные нейтрофилы, сегментоядерные нейтрофилы; псевдоэозинофилы, эозинофилы, псевдобазофилы, моноциты; малые и большие лимфоциты.

Окрашенные мазки изучали с помощью системы анализа изображений «ВидеоТест - Морфо», которая представляет собой автоматизированное рабочее место, предназначенное для проведения морфологического, стереологического и морфометрического анализа изображений со статистической обработкой полученных результатов. Мазок устанавливается под микроскоп, соединенный с TV-камерой. Телевизионный сигнал с TV-камеры передавался на плато ввода изображений и для визуализации на монитор видеоконтрольного устройства или видеоокно монитора компьютера. В плате ввода TV-сигнал оцифровывался, и изображение в цифровой форме передалось в ОЗУ компьютера для обработки и анализа. Программа позволила получить измерения различных параметров эритроцитов, провести статистическую обработку результатов, получить графики зависимости параметров [53].

Это интересно:

Жан Батист Ламарк
Жан Батист Ламарк, французский исследователь стал первым биологом, попытавшимся создать стройную и целостную теорию эволюции живого мира. Не оценённая современниками, полвека спустя его теория стала предметом горячих дискуссий, которые не ...

Влияние различных факторов среды на исследуемый объект. Влияние температуры на жизненные функции данного объекта
Температура воды является одним из важнейших факторов, оказывающих воздействие на отправление жизненных функций рыбы, определяющих ее рост и развитие. Этот фактор действует на рыбу как непосредственно – изменяя интенсивность ферментативны ...

Результаты и обсуждение. Выделение белка с молекулярной массой 55 кДа
1 2 3 4 5 6 Выделение белка с м. м. 55 кДа из внутренней мембраны митохондрий печени крыс проводили методом водно-этанольной экстракции [3]. Очистка белка проводилась методом ионообменной хроматографии с использованием ДЭАЭ-це ...