Материал и методика
Страница 3

Фиксировали и окрашивали мазки способом окраски по Паппенгейму. Предметные стекла ставили в киевский аппарат для массовой окраски мазков и заливали красителем-фиксатором Мая-Грюнвальда. Через 3 мин его заменяли рабочим красителем Романовского. Продолжали окрашивание в течение 15 мин, после чего краситель сливали, а мазки промывали водопроводной водой. Потом стекла ставили под углом для высушивания [57].

Определяли следующие показатели крови: концентрацию гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, общего белка в сыворотке крови, лейкоцитарную формулу, цитометрические характеристики эритроцитов.

Подсчет эритроцитов и лейкоцитов проводился с помощью камеры Горяева. Эритроциты считали в 5 больших квадратах камеры, а лейкоциты будут подсчитаны косвенным методом. Определяемую величину получали по формуле (1).

Х = , (1)

где Х- число клеток в 1 мкл крови; а – количество подсчитанных клеток; y – степень разведения крови; n – количество малых квадратов.

для эритроцитов:

Хэ = = а*12500;

для лейкоцитов:

Хл = = а*2500 [53].

Для определения гемоглобина использовали гемиглобинцианидный метод на ФЭК с использованием ацетонциангидрина. Расчет содержания гемоглобина будет проводиться по формуле (2):

Hb, г/л = , (2)

где Еоп – экстинция опытной пробы; Ест – экстинция стандартного раствора; С – концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе (59,75 мг%); К – коэффициент разведения крови; 0,01 – коэффициент для пресчета концентрации гемоглобина из мг в г*л -1 [53].

Концентрацию белка крови рыб определяют с помощью коэффициента преломления сыворотки на рефрактометре. Коэффициент преломления довольно точно свидетельствует о количественном содержании в сыворотке белка, которое определяется по таблице [53].

Концентрацию общего белка в сыворотке крови (в г*л -1) определяют по графику, используя найденный коэффициент преломления [53].

Подсчет лейкоцитарной формулы крови на окрашенных препаратах проводили с использованием светового микроскопа с применением иммерсии (увеличение 90х15, 100х15). На мазках подсчитывали 200 лейкоцитов по общепринятой методике. При идентификации лейкоцитов использовали классификацию клеток крови рыб Н.Т. Ивановой (1983). Подсчет лейкоцитарной формулы проводился по следующим группам лейкоцитов: нейтрофилы, среди которых выделяли: миелоциты нейтрофильные, метамиелоциты нейтрофильные, палочкоядерные нейтрофилы, сегментоядерные нейтрофилы; псевдоэозинофилы, эозинофилы, псевдобазофилы, моноциты; малые и большие лимфоциты.

Окрашенные мазки изучали с помощью системы анализа изображений «ВидеоТест - Морфо», которая представляет собой автоматизированное рабочее место, предназначенное для проведения морфологического, стереологического и морфометрического анализа изображений со статистической обработкой полученных результатов. Мазок устанавливается под микроскоп, соединенный с TV-камерой. Телевизионный сигнал с TV-камеры передавался на плато ввода изображений и для визуализации на монитор видеоконтрольного устройства или видеоокно монитора компьютера. В плате ввода TV-сигнал оцифровывался, и изображение в цифровой форме передалось в ОЗУ компьютера для обработки и анализа. Программа позволила получить измерения различных параметров эритроцитов, провести статистическую обработку результатов, получить графики зависимости параметров [53].

Страницы: 1 2 3 4


Это интересно:

Количественные показатели газообмена
Дыхательный контроль. Возрастание функциональной активности клеток сопровождается усилением дыхания. В значительной степени это достигается благодаря механизму дыхательного контроля, или акцепторного контроля дыхания. Дыхательным .контро ...

Определение способности плесневых грибов использовать различные источники углерода. Определение радиальной скорости роста на твердой среде
Микромицеты характеризуются неодинаковой способностью использовать различные соединения углерода для конструктивного и энергетического метаболизма. Чтобы выяснить возможность роста гриба за счет тех или иных углеродсодержащих веществ, их ...

Подготовка биологического материала. Подготовка сыворотки крови
После декапитации животных кровь собирали в гепаринизированные пробирки и для получения сыворотки подвергают центрифугированию, при 3000 об/мин, в течение 15 минут. После центрифугирования получали сыворотку, не содержащую форменных элеме ...