Выделение ДНК из культивируемых клеток и лимфоцитов

Материалы » Пульс-электрофорез и методы работы с большими молекулами ДНК » Выделение ДНК из культивируемых клеток и лимфоцитов

Процедуры получения ДНК из культивируемых клеток и из простейших имеют много общего. Для рестрикционного картирования необходимо использовать клеточные линии только с нормальным стабильным геномом. Например, клетки HeLa очень удобны для культивирования, но содержат большое количество хромосомных перестроек и имеют разную плоидность. Один миллион диплоидных клеток должен содержать примерно 6,6 мкг ДНК, что соответствует размерам генома 6х10 нуклеотидных пар. Поскольку несинхронизированные клеточные культуры обычно представляют собой смесь диплоидных, тетраплоидных и промежуточных состояний, мы используем для работы 1х10 клеток, считая, что они содержат примерно 10 мкг ДНК.

Процедуру, описанную в табл. 3, использовали также для получения интактных хромосом из различных клеточных линий насекомых. При этом концентрация клеток должна быть пересчитана в соответствии с меньшими размерами генома.

Методика выделения ДНК из лимфоцитов существенно близка используемой для культивируемых клеток, если лимфоциты свободны от примеси эритроцитов. Эритроциты могут быть или лизированы), или удалены с помощью центрифугирования в градиенте фиколла или перколла. Эти методы описаны в табл. 3.


Это интересно:

Обозначения и сокращения
Блф – большой лимфоцит Г – гига (109) Л – лейкоциты М – среднее значение показателя Мн – миелоцит нейтрофильный Мо – моноцит Млф – малый лимфоцит Ммн – метамиелоцит нейтрофильный ОЧЛф – общее число лимфоцитов ОЧН – общее число не ...

Культуральные свойства
Стафилококки – аэробы и факультативные анаэробы. Хорошо развиваются на обычных питательных средах при температуре от 10°С до 43°С (оптимум 30–37°С) при рН – 7,2–7,6. Рост возможен и в слабокислой среде. Стафилококки вызывают диффузное пом ...

Гусиный лук желтый
Является одним из обычных наших эфемероидов . Он растет по лесам, лесным оврагам, кустарникам, всречается в парках. Гусиный лук - самый мелкий представитель семейства лилейных. Мы уже знаем, что короткий вегетационный период при неблагоп ...