Выделение ДНК из культивируемых клеток и лимфоцитов

Материалы » Пульс-электрофорез и методы работы с большими молекулами ДНК » Выделение ДНК из культивируемых клеток и лимфоцитов

Процедуры получения ДНК из культивируемых клеток и из простейших имеют много общего. Для рестрикционного картирования необходимо использовать клеточные линии только с нормальным стабильным геномом. Например, клетки HeLa очень удобны для культивирования, но содержат большое количество хромосомных перестроек и имеют разную плоидность. Один миллион диплоидных клеток должен содержать примерно 6,6 мкг ДНК, что соответствует размерам генома 6х10 нуклеотидных пар. Поскольку несинхронизированные клеточные культуры обычно представляют собой смесь диплоидных, тетраплоидных и промежуточных состояний, мы используем для работы 1х10 клеток, считая, что они содержат примерно 10 мкг ДНК.

Процедуру, описанную в табл. 3, использовали также для получения интактных хромосом из различных клеточных линий насекомых. При этом концентрация клеток должна быть пересчитана в соответствии с меньшими размерами генома.

Методика выделения ДНК из лимфоцитов существенно близка используемой для культивируемых клеток, если лимфоциты свободны от примеси эритроцитов. Эритроциты могут быть или лизированы), или удалены с помощью центрифугирования в градиенте фиколла или перколла. Эти методы описаны в табл. 3.


Это интересно:

Гематологическая характеристика окуня оз. Виштынецкого
Исследования гематологических параметров окуня оз. Виштынецкое проводились в мае 2008 г. Лейкоцитарный состав крови окуня оз. Виштынецкое представлен основными клетками – лимфоцитами, моноцитами, лимфоцитами (большими и малыми), нейтрофи ...

Органы, участвующие в процессе кроветворения
Исследование органов, участвующих в гемопоэзе рыб, позволило установить качественный состав и структурные особенности клеток крови на всех этапах развития. Кроветворение как процесс гистогенеза является ответной реакцией ряда тканевых сис ...

Анализ литературных источников. Работа с терминами.
Характер – это совокупность индивидуальных психических свойств человека, накладывающих отпечаток на его поведение и деятельность. Характер придаёт человеку неповторимое своеобразие, являясь одной из важнейших черт индивидуальности. В нем ...