Методика выделения ДНК из клеток Е. coli представлена в табл. 4. Именно эта методика была с успехом использована для получения интактной хромосомной ДНК широкого набора бактерий и архебактерий, включая Salmonella, Legionella, Mycobacterium, Haemophilus, Bacillus, Streptomyces, Halobacterium и некоторые другие быстрорастущие, сопутствовавшие им. Размеры хромосом у этих бактерий варьируют в пределах от 1 до 20хЮ нуклеотидных пар, количество хромосом на одну клетку также может изменяться от 1 до 5 в зависимости от условий культивирования. Таким образом, в предварительные эксперименты необходимо включить подсчет клеток в широком диапазоне.

В некоторых случаях могут оказаться необходимыми небольшие изменения в методике. Например, в растворе Pett IV, когда его использовали для обработки Halobacterium, концентрацию NaCl пришлось увеличить до 0,5 М, чтобы предотвратить преждевременный лизис клеток.

Прием, описанный в табл. 4, предназначен для синхронизации репликативных вилок, которая достигается инкубацией клеток в хлорамфениколе в течение 1 ч непосредственно перед сбором. Обработка хлорамфениколом позволяет закончиться уже начатым репликативным процессам, но предотвращает запуск новых. Препараты ДНК можно получить и из несинхронизированных культур. Однако необходимо помнить, что области хромосом около точек конца репликации могут быть недопредставлены в некоторых препаратах. Иногда это не имеет значения, но не всегда. Так, например, интенсивность окрашивания бромидом этидия зависит от молекулярного веса. Таким образом, хромосомную ДНК из области терминации репликации будет непросто выявить с помощью этого соединения.

Это интересно:

Витамин U
Витамин U (хлорид метилметионинсульфония). Лечебная доза взрослого человека – 200-250 мг в сутки. Оказывает стимулирующее действие на заживление поврежденной слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта. Содержится в вегетативной массе ...

Концепции возникновения жизни
Теории, касающиеся возникновении Земли и жизни на Земле, разнообразны и далеко не достоверны. Среди главных теорий возникновения жизни следует упомянуть следующие: 1) жизнь была создана сверхъестественным существом в определенное время ...

Биологическая характеристика объекта в связи со средой обитания и образом жизни. Общая биология вида
Вид Благородный, атлантический лосось, семга Salmo salar Тип Хордовые Chordata П/тип Черепные Craniata Н/класс Челюстноротые Gnatostomata Ряд Рыбы Pisces Класс Костные рыбы O ...