Среда выделения (150 мл, рН 7.4): сахароза 70 мМ; маннитол 210 мМ; хепес 10 мМ; ЭГТА 2 мМ. Среду разделяли на три части. В одну (10 мл) добавляли 1 мг протеазы (непосредственно перед выделением). В другую (70 мл) - добавляли 140 мг БСА. В третью (70 мл) ничего не добавляли.

Все процедуры проводили при 4 °С.

Сердце помещали в предварительно охлажденный физраствор и взвешивали. Затем клали сердце в среду с протеазой на 10 минут, измельчая сердце ножницами. Через 10 минут часть жидкости сверху сливали, чтобы удалить частички жира и связки. Далее разводили средой с альбумином в 9 раз и гомогенизировали.

Гомогенат центрифугировали пять минут при 650g (осаждаются ядра и обрывки мембраны).

Супернатант центрифугировали 10 мин при 8000g.

Осадок ресуспендировали в среде без альбумина, центрифугировали 10 минут при 8000g.

Осадок вновь ресуспендировали в среде без альбумина из расчета 0.1 мл среды на 1г ткани сердца и ставили в лед.

Это интересно:

Влияние освещенности, уровня и течения воды на исследуемый объект
Основным источником света в воде является солнечная радиация. Солнечный свет поглощается поверхностным слоем воды, и только 0,45% его достигает глубины 100 м. Освещение водной среды отличается от воздушной. Волны света разной длины достиг ...

Происхождение многоклеточных животных (Мечников, Геккель)
Геккель утверждал, что отдельным предком многокл. была шаровидная колония простейших. Он опирался на данные эмбриологии, говорящей о том, что в онтогенезе внутр. зародышевый пласт образуется путём впячивания (инвагинации) стенки однослой ...

Размножение моллюсков (двустворчатые и брюхоногие)
Двустворчатые моллюски : Большинство двустворчатых моллюсков раздельно полые. Семенники и яичники парные. Протоки открываются обычно в мантийную полость. Оплодотворение яиц наружное. Дробление идёт так же как и у брюхоногих, в рез-те полу ...