Среда выделения (150 мл, рН 7.4): сахароза 70 мМ; маннитол 210 мМ; хепес 10 мМ; ЭГТА 2 мМ. Среду разделяли на три части. В одну (10 мл) добавляли 1 мг протеазы (непосредственно перед выделением). В другую (70 мл) - добавляли 140 мг БСА. В третью (70 мл) ничего не добавляли.

Все процедуры проводили при 4 °С.

Сердце помещали в предварительно охлажденный физраствор и взвешивали. Затем клали сердце в среду с протеазой на 10 минут, измельчая сердце ножницами. Через 10 минут часть жидкости сверху сливали, чтобы удалить частички жира и связки. Далее разводили средой с альбумином в 9 раз и гомогенизировали.

Гомогенат центрифугировали пять минут при 650g (осаждаются ядра и обрывки мембраны).

Супернатант центрифугировали 10 мин при 8000g.

Осадок ресуспендировали в среде без альбумина, центрифугировали 10 минут при 8000g.

Осадок вновь ресуспендировали в среде без альбумина из расчета 0.1 мл среды на 1г ткани сердца и ставили в лед.

Это интересно:

Генетические факторы в развитии зрительных сетей
Определенные свойства основных нейронных сетей формируются еще до того, как животное получает шанс что-либо увидеть. Другие свойства развиваются только в течение первой недели жизни. Ретракция аксонов является неким аналогом событий, прои ...

Основная часть. Некоторые исчезающие животные, занесенные в Красную Книгу
Семиреченский тритон, или лягушкозуб (Рис.1). Распространен в Джунгарском Алатау (горный хребет между рекой Или и озером Алаколь). Рис.1. Семиреченский тритон, или лягушкозуб Не велик по размерам семиреченский тритон, его общая длина ...

Северный кожанок.
Семейство: Обыкновенные летучие мыши. Статус – вид, имеющий в области низкую численность, достаточной информации о котором в настоящее время нет. Распространение. Современных сведений о распространении в области нет. Численность. Д ...