Выделение митохондрий из сердца крыс
Среда выделения (150 мл, рН 7.4): сахароза 70 мМ; маннитол 210 мМ; хепес 10 мМ; ЭГТА 2 мМ. Среду разделяли на три части. В одну (10 мл) добавляли 1 мг протеазы (непосредственно перед выделением). В другую (70 мл) - добавляли 140 мг БСА. В третью (70 мл) ничего не добавляли.
Все процедуры проводили при 4 °С.
Сердце помещали в предварительно охлажденный физраствор и взвешивали. Затем клали сердце в среду с протеазой на 10 минут, измельчая сердце ножницами. Через 10 минут часть жидкости сверху сливали, чтобы удалить частички жира и связки. Далее разводили средой с альбумином в 9 раз и гомогенизировали.
Гомогенат центрифугировали пять минут при 650g (осаждаются ядра и обрывки мембраны).
Супернатант центрифугировали 10 мин при 8000g.
Осадок ресуспендировали в среде без альбумина, центрифугировали 10 минут при 8000g.
Осадок вновь ресуспендировали в среде без альбумина из расчета 0.1 мл среды на 1г ткани сердца и ставили в лед.
Это интересно:
Происхождение клеток в ЦНС млекопитающих
Изучать последовательность развития клеток в ЦНС млекопитающих технически более сложно, потому что отдельные клетки труднее идентифицировать и заполнить красителем. Удачными методиками исследования здесь показали себя картирование путей р ...
Диагностика
Диагноз стафилококковых токсикозов ставят на основании клинической картины болезни и эпидемиологических данных.
Микробиологические исследования вспышек стафилококковых токсикозов ведется в следующих направлениях:
1. выделение возбудител ...
Сезонные явления в жизни птиц
Гнездование птиц. Весной птицы выбирают гнездовые участки, строят или ремонтируют гнезда, самки откладывают в них яйца, а затем насиживают их. Чаще всего птицы гнездятся отдельными парами и охраняют выбранную территорию от вторжения особе ...