Среда выделения (150 мл, рН 7.4): сахароза 70 мМ; маннитол 210 мМ; хепес 10 мМ; ЭГТА 2 мМ. Среду разделяли на три части. В одну (10 мл) добавляли 1 мг протеазы (непосредственно перед выделением). В другую (70 мл) - добавляли 140 мг БСА. В третью (70 мл) ничего не добавляли.

Все процедуры проводили при 4 °С.

Сердце помещали в предварительно охлажденный физраствор и взвешивали. Затем клали сердце в среду с протеазой на 10 минут, измельчая сердце ножницами. Через 10 минут часть жидкости сверху сливали, чтобы удалить частички жира и связки. Далее разводили средой с альбумином в 9 раз и гомогенизировали.

Гомогенат центрифугировали пять минут при 650g (осаждаются ядра и обрывки мембраны).

Супернатант центрифугировали 10 мин при 8000g.

Осадок ресуспендировали в среде без альбумина, центрифугировали 10 минут при 8000g.

Осадок вновь ресуспендировали в среде без альбумина из расчета 0.1 мл среды на 1г ткани сердца и ставили в лед.

Это интересно:

Первая помощь
Ядовитые ягоды опасны прежде всего для тех, кто не знает их «в лицо» и несведущ в свойствах лесных растений. Отправляясь в лес, помните, что ни в коем случае нельзя собирать, а тем более есть неизвестные вам ягоды, как бы они ни были прив ...

Химические соединения и реакциональная способность веществ. Химические процессы и процессы жизнедеятельности
Характер любой системы, как известно, зависит не только от состава и строения ее элементов, но и от их взаимодействия. Именно такое взаимодействие определяет специфические, целостные свойства самой системы. Поэтому при исследовании разноо ...

Стадия развития кефалевых рыб
Такой тип развития сопровождается сложным метаморфозом – совокупностью процессов, которые обеспечивают развитие от личиночных фаз до взрослых форм. При метаморфозе исчезают структуры, связанные с личиночным образом жизни и появляются ор ...