Потенциал-зависимый вход ионов К+ в митохондрии вызывает вход осмотически облигатной воды, что ведет к набуханию и увеличению оптической плотности.

Среда для набухания: КCl 50 mM; NaH2PO4 5 mM; MgCl2 0.5 mM; Hepes 5 mM; EGTA 100 мкM.

В кювету добавляли: 5 мкМ цитохром С - 4 мкл; 1 мМ Rotenone (если в качестве субстрата сукцинат) – 10 мкл; 2 мл среды; модуляторы, активные вещества, и. т. п; митохондрии.

Использовали метод динамического определения оптической плотности при длине волны 520 нм, установив время измерения равное трем минутам. Через полторы минуты добавляли субстрат (сукцинат или малат с глутаматом). По окончании измерения данные сохраняли в Excel и рассчитывали изменение оптической плотности в минуту на милиграмм белка митохондрий.

Это интересно:

Устройство микроскопа. Микроскопия в светлом поле. Устройство микроскопа
Микроскопия в светлом поле осуществляется в проходящем свете. При выполнении заданий настоящего практикума каждый студент работает с микроскопом (рис. 1). Рис. 1. Микроскоп В микроскопе различают механическую, оптическую и осветительн ...

Амперометрические биосенсоры
Амперометрическое детектирование находит широкое применение при анализе биологических сред. В оптимальных условиях метод позволяет определять концентрации до 10~8-10~9 М, при этом величина сигнала варьируется в пределах трех-четырех поряд ...

Зеленая электростанция
Существует еще один путь использования человеком солнечной энергии, усвоенной растениями, – непосредственная трансформация световой энергии в электрическую. Выше мы проследили путь возбужденного квантом света электрона в ходе фотосинтеза ...