Спектрофотометрическое определение скорости набухания митохондрий

Потенциал-зависимый вход ионов К+ в митохондрии вызывает вход осмотически облигатной воды, что ведет к набуханию и увеличению оптической плотности.

Среда для набухания: КCl 50 mM; NaH2PO4 5 mM; MgCl2 0.5 mM; Hepes 5 mM; EGTA 100 мкM.

В кювету добавляли: 5 мкМ цитохром С - 4 мкл; 1 мМ Rotenone (если в качестве субстрата сукцинат) – 10 мкл; 2 мл среды; модуляторы, активные вещества, и. т. п; митохондрии.

Использовали метод динамического определения оптической плотности при длине волны 520 нм, установив время измерения равное трем минутам. Через полторы минуты добавляли субстрат (сукцинат или малат с глутаматом). По окончании измерения данные сохраняли в Excel и рассчитывали изменение оптической плотности в минуту на милиграмм белка митохондрий.


Это интересно:

Покровы тела
Способность живых существ к жизни в различных условиях является результатом эволюции не только их самих, но и их систем органов. Ниже мы рассмотрим это заключение на примерах эволюции систем органов животных, начиная с простейших и заканч ...

Жизненный цикл паразитов. Чередование поколений и феномен смены хозяев; промежуточные и основные хозяева. Понятие о био- и геогельминтах. Примеры
Жизненный цикл – это совокупность всех стадий развития «от яйца до яйца», а при отсутствии яйца от любой стадии до ближайшей такой же. Основными биологическими моментами жизни всякого организма являются приспособления, обеспечивающие сохр ...

Термины «клон» и «клонирование»
Термин клон происходит от греческого слова «klon», что означает «веточка, побег, отпрыск». Клонированию можно давать много определений. Одно из самых распространенных утверждает, что клонирование- популяция клеток или организмов произошед ...