Спектрофотометрическое определение скорости набухания митохондрий

Потенциал-зависимый вход ионов К+ в митохондрии вызывает вход осмотически облигатной воды, что ведет к набуханию и увеличению оптической плотности.

Среда для набухания: КCl 50 mM; NaH2PO4 5 mM; MgCl2 0.5 mM; Hepes 5 mM; EGTA 100 мкM.

В кювету добавляли: 5 мкМ цитохром С - 4 мкл; 1 мМ Rotenone (если в качестве субстрата сукцинат) – 10 мкл; 2 мл среды; модуляторы, активные вещества, и. т. п; митохондрии.

Использовали метод динамического определения оптической плотности при длине волны 520 нм, установив время измерения равное трем минутам. Через полторы минуты добавляли субстрат (сукцинат или малат с глутаматом). По окончании измерения данные сохраняли в Excel и рассчитывали изменение оптической плотности в минуту на милиграмм белка митохондрий.


Это интересно:

Концентрирование вируса
Предложен простой метод концентрирования РСВ преципитацией полиэтиленгликолем. 1. Готовят 36% -ный раствор ПЭГ 6000 в дистиллированной воде. 2. Раствор охлаждают и добавляют к содержащей вирус жидкости до конечной концентрации ПЭГ 6%. ...

Клетка. Растительные ткани
Среди растений наиболее высоко организованы цветковые, или покрытосеменные. Эти растения изучают на разных уровнях их биологической организации: клетки, ткани, органа. Орган — это часть тела организма, выполняющая определенную функцию (фу ...

Температурный режим
Нагрев воды начинается в марте, а наибольшим оказывается в апреле. Отдача тепла водою наблюдается в июле. Максимальное охлаждение водных масс Балхаша приходится на октябрь, а минимальное – на декабрь в период образования льда. Осенний пе ...