Спектрофотометрическое определение скорости набухания митохондрий

Потенциал-зависимый вход ионов К+ в митохондрии вызывает вход осмотически облигатной воды, что ведет к набуханию и увеличению оптической плотности.

Среда для набухания: КCl 50 mM; NaH2PO4 5 mM; MgCl2 0.5 mM; Hepes 5 mM; EGTA 100 мкM.

В кювету добавляли: 5 мкМ цитохром С - 4 мкл; 1 мМ Rotenone (если в качестве субстрата сукцинат) – 10 мкл; 2 мл среды; модуляторы, активные вещества, и. т. п; митохондрии.

Использовали метод динамического определения оптической плотности при длине волны 520 нм, установив время измерения равное трем минутам. Через полторы минуты добавляли субстрат (сукцинат или малат с глутаматом). По окончании измерения данные сохраняли в Excel и рассчитывали изменение оптической плотности в минуту на милиграмм белка митохондрий.


Это интересно:

Общее описание методов. РНКазное расщепление
Единичные нуклеотндные замены во фрагментах геномной ДНК можно обнаружить при расщеплении неспаренных участков в РНК-ДНК-дуплексах, обрабатывая эти дуплексы РНКазой А.Рис. 1 иллюстрирует последовательные этапы процедуры. 1. Синтез равном ...

Исследование взаимосвязи группы крови и характера человека. Процедура исследования.
В соответствии с целями и задачами нашей работы была разработана следующая процедура исследования. Первый этап включил в себя диагностическое исследование с использованием соответствующих методик. Были проведены: 1. Тест на определение ...

Общее понятие культуры и ее основные разновидности. Культура и природа. Концепция «альтернативы двух культур» Ч. Сноу.
В самом общем смысле культура понимается, как все то, что сделано человеком его трудовой деятельностью. Культура понимается как оппозиция природе - это соотношение естественного и искусственного и в этом смысле культура преобразована чел ...