Спектрофотометрическое определение скорости набухания митохондрий

Потенциал-зависимый вход ионов К+ в митохондрии вызывает вход осмотически облигатной воды, что ведет к набуханию и увеличению оптической плотности.

Среда для набухания: КCl 50 mM; NaH2PO4 5 mM; MgCl2 0.5 mM; Hepes 5 mM; EGTA 100 мкM.

В кювету добавляли: 5 мкМ цитохром С - 4 мкл; 1 мМ Rotenone (если в качестве субстрата сукцинат) – 10 мкл; 2 мл среды; модуляторы, активные вещества, и. т. п; митохондрии.

Использовали метод динамического определения оптической плотности при длине волны 520 нм, установив время измерения равное трем минутам. Через полторы минуты добавляли субстрат (сукцинат или малат с глутаматом). По окончании измерения данные сохраняли в Excel и рассчитывали изменение оптической плотности в минуту на милиграмм белка митохондрий.


Это интересно:

АТФ как основная энергетическая валюта клетки, её структура и функции. Механизмы синтеза АТФ
Процессы обмена вещества включают в себя реакции, идущие с потреблением энергии, и реакции с выделением энергии. В некоторых случаях эти реакции сопряжены. Однако часто реакции, в которых энергия выделяется, отделены в пространстве и во в ...

Результаты исследования и их обсуждение. Активность катепсина D в плацентарной ткани в норме и при хронической внутриутробной гипоксии плода
Результаты исследования показали достоверное повышение активности катепсина D плацентарной ткани при хронической внутриутробной гипоксии плода. Отмечено повышение активности фермента при патологии в 1,8 раз по сравнению с нормой (рис.2). ...

Гематологическая характеристика окуня оз. Виштынецкого
Исследования гематологических параметров окуня оз. Виштынецкое проводились в мае 2008 г. Лейкоцитарный состав крови окуня оз. Виштынецкое представлен основными клетками – лимфоцитами, моноцитами, лимфоцитами (большими и малыми), нейтрофи ...