Результаты и обсуждение. Выделение белка с молекулярной массой 55 кДа

1 2 3 4 5 6

Выделение белка с м. м. 55 кДа из внутренней мембраны митохондрий печени крыс проводили методом водно-этанольной экстракции [3]. Очистка белка проводилась методом ионообменной хроматографии с использованием ДЭАЭ-целлюлозы в качестве носителя. Присутствие белка во фракциях обнаруживали с помощью SDS-электрофореза в 10%-ом ПААГ (рис 3).

Рисунок 3. SDS-электрофорез фракций после повторной хроматографии. На треке 1 – маркер. На треках 2,3 – белок с Мr 55 кДа (фракции с 250 мМ КСl)

Дополнительная проверка фракций проводилась на приборе для определения проводимости искусственных бислойных мембран. При встраивании белка фракции, содержащих канальную субъединицу мито-К+АТФ обнаруживалась проводимость мембран, ингибируемая АТФ (рис 4).

Для дополнительной очистки проводили повторную хроматографию активной фракции. Для окончательной очистки белка до электрофоретически гомогенного состояния проводился нативный электрофорез активной фракции с последующей элюцией белка с геля.

Рисунок 4. К+-транспортирующая АТФ-ингибируемая активность белка с молекулярной массой 55 кДа, реконструированного в искусственную мембрану.

Электрофоретически гомогенный АТФ-ингибируемый К+-транспортирующий белок с Mr 55 кДа замораживали и накапливали для иммунизации. При выделении вышеописанным методом из 100 г печени крыс получали 30-70 мкг очищенного белка. Иммунизацию кроликов проводили при накоплении 0.2-0.4 мг белка.


Это интересно:

Индивидуальные различия в процессе роста и развития
Индивидуальные различия в процессе роста и развития могут варьироваться в широких пределах. Существование индивидуальных колебаний процессов роста и развития послужило основанием для введения такого понятия, как биологический возраст, или ...

Влияние экологических условий на жизнеспособность мицелия микроскопических грибов
При определении жизнеспособности грибного мицелия разной длины в различных экологических условиях среды, установлено, что увеличение концентрации органического вещества (сахарозы) в интервале 0–20 г/л было благоприятно для фрагментов Muco ...

Поясните понятие химических связей и приведите примеры. Какова роль энергии и энтропии при образовании молекул?
Химики изучают в основном поведение материи, которое они описывают на основе знаний свойств химических элементов и их соединений. Большую часть этой области знаний интерпретируют, пользуясь сведениями о молекулах, которые обычно являются ...