1 2 3 4 5 6

Выделение белка с м. м. 55 кДа из внутренней мембраны митохондрий печени крыс проводили методом водно-этанольной экстракции [3]. Очистка белка проводилась методом ионообменной хроматографии с использованием ДЭАЭ-целлюлозы в качестве носителя. Присутствие белка во фракциях обнаруживали с помощью SDS-электрофореза в 10%-ом ПААГ (рис 3).

Рисунок 3. SDS-электрофорез фракций после повторной хроматографии. На треке 1 – маркер. На треках 2,3 – белок с Мr 55 кДа (фракции с 250 мМ КСl)

Дополнительная проверка фракций проводилась на приборе для определения проводимости искусственных бислойных мембран. При встраивании белка фракции, содержащих канальную субъединицу мито-К+АТФ обнаруживалась проводимость мембран, ингибируемая АТФ (рис 4).

Для дополнительной очистки проводили повторную хроматографию активной фракции. Для окончательной очистки белка до электрофоретически гомогенного состояния проводился нативный электрофорез активной фракции с последующей элюцией белка с геля.

Рисунок 4. К+-транспортирующая АТФ-ингибируемая активность белка с молекулярной массой 55 кДа, реконструированного в искусственную мембрану.

Электрофоретически гомогенный АТФ-ингибируемый К+-транспортирующий белок с Mr 55 кДа замораживали и накапливали для иммунизации. При выделении вышеописанным методом из 100 г печени крыс получали 30-70 мкг очищенного белка. Иммунизацию кроликов проводили при накоплении 0.2-0.4 мг белка.

Это интересно:

Биологические особенности акклиматизации
Акклиматизация рыб и кормовых объектов является составной частью комплексных мероприятий по воспроизводству рыбных запасов и кормовых ресурсов водоемов. Задачей акклиматизационных работ является повышение продуктивности и хозяйственной ц ...

Эпидемии в новейшей истории
Ценой огромных жертв и усилий человечество научилось-таки бороться со многими из болезней, рассмотренных в первой главе. Казалось, что все самое страшное позади. Но в конце прошлого тысячелетия человек столкнулся с новыми коварными врагам ...

Задания развивающего характера по теме "Отряд жесткокрылые. Плавунец"
Объясните второе название отряда Жуки, исходя из особенностей их внешнего строения. Предположите, почему жуки имеют разную окраску надкрыльев. В чем отличие ротового аппарата вшей и жуков? Объясните, что значит выражение: "Развити ...