Результаты и обсуждение. Выделение белка с молекулярной массой 55 кДа
|
Рисунок 3. SDS-электрофорез фракций после повторной хроматографии. На треке 1 – маркер. На треках 2,3 – белок с Мr 55 кДа (фракции с 250 мМ КСl)
Дополнительная проверка фракций проводилась на приборе для определения проводимости искусственных бислойных мембран. При встраивании белка фракции, содержащих канальную субъединицу мито-К+АТФ обнаруживалась проводимость мембран, ингибируемая АТФ (рис 4).
Для дополнительной очистки проводили повторную хроматографию активной фракции. Для окончательной очистки белка до электрофоретически гомогенного состояния проводился нативный электрофорез активной фракции с последующей элюцией белка с геля.
Рисунок 4. К+-транспортирующая АТФ-ингибируемая активность белка с молекулярной массой 55 кДа, реконструированного в искусственную мембрану.
Электрофоретически гомогенный АТФ-ингибируемый К+-транспортирующий белок с Mr 55 кДа замораживали и накапливали для иммунизации. При выделении вышеописанным методом из 100 г печени крыс получали 30-70 мкг очищенного белка. Иммунизацию кроликов проводили при накоплении 0.2-0.4 мг белка.
Это интересно:
Австралопитеки
Первая находка была сделана в 1924 году на территории ЮАР, в восточной части пустыни Калахари, недалеко от Таунга ("львиное место"). Это был череп, эндокран и фрагмент нижней челюсти. Вначале считалось, что череп принадлежит обе ...
Поведение и психика. Потребности. Поведение и
психика
Нормальная жизнедеятельность организма возможна лишь при поддержании относительно постоянного состава внутренней среды. Организм непрерывно регулирует недостаток или избыток питательных веществ, минеральных солей и других соединений. Нужд ...
Простые организмы
Водоросли, с такой поразительной регулярностью осуществляющие свои циклы на песчаных пляжах залива Кейп-Код, состоят всего лишь из одной клетки. Следовательно, механизм, ответственный за циркадианные ритмы их активности, должен находиться ...