Чистые культуру базидиомицетов могут быть выделены из плодовых тел базидиоспор, путем их проращивания из корней микоризиообразующих растений или же почвы, древесины и других субстратов, являющихся средой обитания этих грибов. Наиболее простым и удобным способом получения желаемых культур высших базидиальных грибов является выделение культур из плодовых тел или базидиоспор, если они легко прорастают. Выделение культур из субстрата или миноризных окончаний корней, применяющиеся для специальных исследований, мало эффективно, и идентификация полученных культур представляет большие трудности (Шемаханова, 1962).

Получение чистых культур из плодовых тел Для выделения следует выбирать молодые, не поврежденные плодовые тела, так как они меньше инфецированы микроорганизмами. Выделение можно проводить в день сбора или хранить плодовые тела в течение двух-трех дней в холодильнике в полиэтиленовых мешочках.

Обработка плодовых тел.

Перед выделением плодовое тело следует осторожно очистить от прилипших растительных остатков, промыть в проточной и стерильной воде и положить на фильтровальную бумагу, чтобы оно обсохло. Промывать плодовые тела нужно быстро, чтобы они не напитались водой. Плодовое тело можно простерилизовать, обтирая 96-градусным спиртом или погружая на несколько секунд в 1%-ный раствор сулемы, 3%-ный раствор перекиси водорода, раствор формалина (1:300), после чего тщательно отмыть в воде и дать обсохнуть. Плодовое тело можно так же быстро обжечь над пламенем горелки.

Выделение инокулюма.

Предварительно обработанная одним из описанных выше способов плодовое тело разламывают и переносят на спар кусочек "ткани" из середины стерильным скальпелем, ланцетом или копьем. Ни в коем случае не обжигать инокулюм в пламене горелки. Выделят инокулюм из разных частей плодового тела: шляпки, ножки, место перехода шляпки в ножку, гимениального слоя. При выборе участка ткани нужно исходить из размеров и строения плодового тела. Выделение лучше производить из самой толстой части плодового тела. Кусочки плодового тела помещают на питательную среду в чашки Петри, чашечки для тканевых культур или пробирки. Расход среды при посеве на чашки для тканевых культур (диаметр 5-7 см.) незначителен, в каждой такой чашке находится только один кусочек, что важно для предотвращения загрязнения. Кусочки плодового тела помещают сверху на спар или частично погружают в агаризованную среду. Инокулюм дереворазрушающих рекомендуется выделять следующим образом (Punaren, 1967). Во влажную камеру помещают тщательно отмытые, разрезанные плодовые тела или же кусочки древесины, пронизанные мицелием гриба. Чашку с инокулюмом помещают в термостат при температуре 20-25 градусов С; при температуре 26-28 градусов С и выше скорость выделения может замедляться. Желательно чтобы относительная влажность воздуха была не ниже 80%, для чего в термостат можно поставить сосуд с водой.

Выделение культур обычно производят на плотную среду: суслоагар, солодовый агар, картофельно-глюкозный агар и т.д. Если выделение идет плохо или мицелий не переходит с инокулюма на поверхность среды, в состав последней следует добавить дрожжевой автолизат, отвары коры, хвои или листьев различных высших растений (обычно в количестве от 0.5 до 5%), экстраты из плодовых тел грибов. В чашках Петри вместе с колониями базидиальных грибов могут расти колонии плесневых грибов, дрожжей, бактерий, что обычно легко заметить. В таких случаях предполагаемые колонии базидиомицетов нужно последовательно пересеять и избавиться от инфекций с помощью обычных методов микробиологической техники.

Но следует иметь в виду, что разные штаммы одного и того же вида могут значительно отличаться по скорости роста и требованию к питательной среде. По разному происходит выделение из плодовых тел неодинакового возраста.[9]

Остальные методы, т.е. из базидиоспор, субстратов, миноризных окончаний корней в наших исследованиях малоэффективны.

Это интересно:

Семейство Волчьи
Волк обыкновенный - распространен достаточно широко. Он встречается на Пиренейском полуострове, в Италии, Польше, Скандинавии, Финляндии, почти по всей территории России, начиная от ряда арктических островов и побережья Северного Ледовито ...

Порядок ностокальные – Nostocales
Порядок объединяет водоросли с гетероцитными неразветвленными нитями или нитями с ложным ветвлением. Род анабена – обычно одиночные или собранные в неправильные скопления нити. Нити симметричные, одинаковой ширины на всем протяжении, сос ...

Очистка матричной РНК для трансляции
Матричную РНК для трансляции in vitro получают следующим образом. 1. 50-Ю6 клеток заражают РСВ. Клетки инкубируют 10-12 ч при 37 °С. 2. Монослой промывают, снимают клетки со стекла и суспендируют в буферном растворе. Суспензию оставляют ...