Радиоиммунопреципитация проводится стандартным методом, описанным, например, Ферни и Герином и Уордом и др. Для РСВ применяют следующую методику.

1. "Монослойные культуры клеток в чашках Петри диаметром 50 мм заражают РСВ с множественностью инфекции более 1 БОЕ/кл. Через определенные промежутки времени после заражения проводят импульсное мечение. Для этого культуральную среду в чашках заменяют на 1 мл PBS, содержащего 30 мкКи - метионина и 25 мкКи - цистеина, и инкубируют чашки при 31 °С 1 ч.

2. Радиоактивный раствор сливают и монослой промывают охлажденным PBS.

3. Клетки снимают со стекла с помощью стерильной резиновой палочки и осаждают центрифугированием.

4. Клетки ресуспендируют в 200 мкл лизирующего буфера, инкубируют суспензию 30 мин в ледяной бане, затем интенсивно перемешивают.

5. Ядра и клеточный дебрис удаляют центрифугированием 5 мин при 10 000 g.

6. Лизат осветляют инкубацией с 50 мкл 10% -ной суспензии фиксированных формалином стафилококков или с 50 мкл суспензии покрытых белком-А гранул 30 мин при 0°С.

7. Стафилококки удаляют центрифугированием. К 50 мкл лизата добавляют 10 мкл гипериммунной сыворотки, перемешивают и инкубируют 3 ч во льду.

8. Добавляют 100 мкл суспензии стафилококков, перемешивают и инкубируют смесь 30 мин при комнатной температуре.

9. Иммунные комплексы осаждают центрифугированием 20 с при 10 000 g.

10. Осадок 3 раза промывают раствором, содержащим 500 мМ LiCl, 100 мМ трис-HCl, рН 8,5.

11. Осадок после промывки ресуспендируют в 50 мкл смеыг для диссоциации, кипятят 2 мин и либо немедленно наносят на гель для электрофореза, либо хранят при - 20 °С.

Это интересно:

Электрические свойства: электропроводность и ионная специфичность
Электрические свойства лежат в основе многих клеточных процессов; один из них — избирательное связывание ионов. Свободные ионы в растворе электростатически взаимодействуют с центрами связывания в макромолекулах и мембранах. Такие взаимоде ...

Экскурсия «в сосновом бору»
Во время экскурсии по сосновому лесу я сравнила по внешнему виду деревья, выросшие в гуще леса и одиночно. У тех деревьев, что росли одиночно, раскидистая крона, количество отмерших нижних веток невелико. А те, которые росли в гуще, отлич ...

Надотряд сумчатых. Коала
Сумчатые млекопитающие, за исключением американских опоссумов и ценолестовых, распространены на материке Австралии, на Новой Гвинее и близлежащих островах. К этому отряду относятся около 250 видов. Сумчатые – это более сложно организованн ...