Метод выявления дефектных интерферирующих частиц

Материалы » Группа пневмовирусов » Метод выявления дефектных интерферирующих частиц

Дефектные интерферирующие частицы и стандартные вирионы РСВ не удается разделить физическими методами, на проявление устойчивой к ультрафиолетовому облучению и чувствительной к нейтрализующим антителам интерферирующей активности при пассировании вируса с высокой множественностью инфекции свидетельствует о накоплении ДИЧ. Разра-Зотзн колориметрический метод количественного определения ДИЧ в препаратах РСВ. Он основан на измерении интенсивности окрашивания, обусловленного поглощением нейтрального красного клетками, которые выживают при заражении стандартным вирусом в результате защиты ДИЧ. Приводятся данные о том, что колориметрический метод чувствительнее, чем метод, основанный на определении снижения выхода вируса. Колориметрический анализ проводят следующим образом.

1. Монослойные культуры клеток Нер-2, выращенные в лунках планшета диаметром 16 мм, инкубируют с содержащим ДИЧ материалом 2 ч при 37 °С.

2. Содержащий ДИЧ иннокулят удаляют и заражают клетки стандартным вирусом, полученным в результате пассирования с низкой множественностью, и продолжают адсорбцию 2 ч при 37 °С.

3. В каждую лунку вносят по 1 мл культуральной среды и инкубируют клетки 72 ч при 37 °С.

4. Среду удаляют и вносят в каждую лунку по 0,5 мл нейтрального красного в растворе Эрла; инкубацию клеток продолжают еще 2 ч при 37 °С.

5. Краситель удаляют и клетки дважды промывают PBS.

6. Краситель экстрагируют из клеток 1 мл 50% -ного этанола, содержащим 0,1 М NaH2P04, и определяют его количество спектрофотометрически при 540 нм. Полученные данные сравнивают с количеством красителя, экстрагированного из незараженных клеток и из клеток, зараженных стандартным вирусом.

Концентрацию ДИЧ можно рассчитать следующим образом, предполагая, что их распределение по клеткам подчиняется закону Пуассона:

число ДИЧ/мл= 1/разведение, обеспечивающее выживание 63% клеток Х общее число клеток X 1/объем иннокулята.


Это интересно:

Выявление и определение количества стафилококков в пищевых продуктах
Выявление и определение количества этих микроорганизмов в пищевых продуктах проводят в соответствии с ГОСТ 10444.2–94. Для этого делают посев в жидкую селективную среду (с предварительным обогащением) и на агаризованные селективно-диагнос ...

Основы концепции ноосферы В.И.Вернадского
В 1923 году Вернадский в своих лекциях по геохимии, прочитанных в Париже, впервые указал на явление дисимметрии нашей планеты на примере "подвижной части земной коры" - астеносферы в районе Тихого океана: " Существование д ...

Размножение. Половое и бесполое размножения. Формы бесполого и полового размножения. Биологическое значение
Размножение – способность организмов производить себе подобных, одно из основных свойств всех живых существ. Способность к размножению часто оценивают как отличительный признак живого. Бесполое размножение – форма размножения, не связанн ...