Анализ вирусных РНК и белков методом электрофореза в полиакриламидном геле. Анализ белков
Синтезированные in vivo или in vitro меченые белки можно анализировать с помощью электрофореза в 10% -ном или б - 15% -ном градиентном полиакриламидном геле, как описано Марсденом и др. .
После электрофоретического разделения в полиакриламидном геле белки можно перенести на нитроцеллюлозный фильтр для биохимического или иммунологического анализа. Применение этого метода к белкам РСВ описано Хиерхольцером и др. Перенос белков из. полиакриламидного геля на нитроцеллюлозу осуществляется электрофоретически по нижеследующей методике.
1. После электрофоретического разделения белков полиак-риламидный гель помещают в камеру прибора для электрофоретического переноса вместе с листом нитроцеллюлозы. В камеру заливают буферный раствор, содержащий 0,025 М трис, 0, 193 М глицин и 20% метанола, рН 8,35.
2. Для переноса проводят электрофорез при 60 В по крайней мере 4 ч при 4°С.
3. Лист нитроцеллюлозы разрезают на полоски и помещают каждую в закрытую пробирку.
4. Полоски инкубируют с анти-РСВ сывороткой 2 ч при комнатной температуре.
5. Полоски 3 раза промывают PBS, содержащим твин 80.
6. Полоски инкубируют с конъюгатом, разведенным в 1000 раз, 3 ч при комнатной температуре.
7. Полоски 3 раза промывают тем же раствором.
8. Нитроцеллюлозу проявляют раствором, содержащим 50 мг 3,3'-диаминобензидина и 100 мкл 3% -ной перекиси водорода в 100 мл PBS, рН 7,2.
9. Нитроцеллюлозу промывают водой и сушат на листе фильтровальной бумаги.
10. Количественный анализ можно провести спектрофотометрически после обработки нитроцеллюлозы веществами, растворяющими пластмассы. В результате подобной обработки нитроцеллюлоза становится прозрачной.
Это интересно:
Типы ритмов
Золотистые водоросли демонстрируют суточный ритм, хотя их сутки и составляют 24,8 ч. Подобные ритмы называются циркадианными (от латинских слов circa - около и dies - день) или околосуточными.
Цикл сна и бодрствования у человека, суточны ...
Гелиамфора
Гелиамфоры встречаются на территории Венесуэлы, Бразилии и Гвианы, где растут на труднодоступных песчанистых плато, на высотах 1000-3000 м над уровнем моря Гелиамфоры являются эволюционными родственниками саррацений, однако в комнатной ку ...
Канальцевая секреция и ее регуляция
Канальцевой секрецией называют активный транспорт в мочу веществ, содержащихся в крови или образуемых в самих клетках канальцевого эпителия, например аммиака. Секреция осуществляется, как правило, против концентрационного или электрохимич ...