Предложен метод очистки гликопротеинов РСВ, основанный на солюбилизации вирионов неионным детергентом в буферном растворе с низкой ионной силой.

1. Очищенные методом градиентного центрифугирования вирионы осаждают центрифугированием через слой 30% -ного раствора сахарозы в буфере NTE при 50 000 g 60 мин. Осадок ресуспендируют в 0,01 М фосфатном буфере, содержащем 10% тритона Х-100.

2. Суспензию перемешивают 30 мин при комнатной температуре и центрифугируют 60 мин при 200 000 g.

3. Супернатант экстрагируют п-бутанолом.

4. Экстрагированные белки суспендируют в 0,01 М фосфатном буфере с 1% тритона Х-100 и фракционируют в 5-25% -ном линейном градиенте концентрации сахарозы, содержащем 1% тритона Х-100, 18 ч при 100 000 g. Собирают фракции из верхней части градиента и диализуют их против 0,01 М фосфатнога буфера.

5. Тритон Х-100 удаляют экстракцией п-бутанолом.

6. Фракции, содержащие вирусные гликопротеины, идентифицируют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.

Это интересно:

Специальные методы исследования. Изучение антиоксидантных свойств селенопирана in vitro
Изучение антиоксидантных свойств СП in vitro проводили в системе нерафинированных растительных масел: подсолнечного, смеси масел льна и расторопши пятнистой. В модельной системе с подсолнечным маслом для сравнения использовали бутилоксито ...

Класс: млекопитающие. Общая характеристика
Млекопитающие – наиболее высокоорганизованный класс позвоночных животных. Основные прогрессивные черты млекопитающих следующие: 1) высокое развитие центральной нервной системы, в первую очередь серой коры полушарий большого мозга – центр ...

Выводы
1. Выявлен высокий процент псевдоэозинофилов в крови двухгодовалых линей, выращиваемых в условиях УЗВ, что, вероятно, связано со специфическими условиями выращивания в УЗВ. 2. Между созревающими самками и самцами линя не выявлено достове ...