Предложен метод очистки гликопротеинов РСВ, основанный на солюбилизации вирионов неионным детергентом в буферном растворе с низкой ионной силой.

1. Очищенные методом градиентного центрифугирования вирионы осаждают центрифугированием через слой 30% -ного раствора сахарозы в буфере NTE при 50 000 g 60 мин. Осадок ресуспендируют в 0,01 М фосфатном буфере, содержащем 10% тритона Х-100.

2. Суспензию перемешивают 30 мин при комнатной температуре и центрифугируют 60 мин при 200 000 g.

3. Супернатант экстрагируют п-бутанолом.

4. Экстрагированные белки суспендируют в 0,01 М фосфатном буфере с 1% тритона Х-100 и фракционируют в 5-25% -ном линейном градиенте концентрации сахарозы, содержащем 1% тритона Х-100, 18 ч при 100 000 g. Собирают фракции из верхней части градиента и диализуют их против 0,01 М фосфатнога буфера.

5. Тритон Х-100 удаляют экстракцией п-бутанолом.

6. Фракции, содержащие вирусные гликопротеины, идентифицируют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.

Это интересно:

Точные (индивидуальные игры)
Неманипуляционные игры Категория 1. Игры типа И→С. (Локомоционные игры; устанавливаются только непосредственные связи индивида с субстратом игровой активности.)- Манипуляционные игры Категория 2. Игры типа И→O. (Манипуляцио ...

Материал и методика
Объектами исследования были линь (Tinca tinca L.) и окунь (Perca fluviatilis L.), а также их кровь, взятая у живых рыб. Сбор материала для определения гематологических показателей рыб проводился в 2007 - 2008 гг. в аквариальной кафедры «А ...

Овогенез. Особенности формирования женских гамет
Овогенез – это процесс выработки яичниками зрелых яйцеклеток. Этот процесс существенно отличается от сперматогенеза в мужском организме. Овогенез начинается в зародыше женского пола задолго до рождения. Клетки, из которых в будущем могут ...