Очистка вирионных гликопротеинов

Материалы » Группа пневмовирусов » Очистка вирионных гликопротеинов

Предложен метод очистки гликопротеинов РСВ, основанный на солюбилизации вирионов неионным детергентом в буферном растворе с низкой ионной силой.

1. Очищенные методом градиентного центрифугирования вирионы осаждают центрифугированием через слой 30% -ного раствора сахарозы в буфере NTE при 50 000 g 60 мин. Осадок ресуспендируют в 0,01 М фосфатном буфере, содержащем 10% тритона Х-100.

2. Суспензию перемешивают 30 мин при комнатной температуре и центрифугируют 60 мин при 200 000 g.

3. Супернатант экстрагируют п-бутанолом.

4. Экстрагированные белки суспендируют в 0,01 М фосфатном буфере с 1% тритона Х-100 и фракционируют в 5-25% -ном линейном градиенте концентрации сахарозы, содержащем 1% тритона Х-100, 18 ч при 100 000 g. Собирают фракции из верхней части градиента и диализуют их против 0,01 М фосфатнога буфера.

5. Тритон Х-100 удаляют экстракцией п-бутанолом.

6. Фракции, содержащие вирусные гликопротеины, идентифицируют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.


Это интересно:

Характеристика оз. Виштынецкого
Сувалкская возвышенность - озерный край, расположенный на юго-восточной границе с Польшей и Литвой. |Подлинной жемчужиной края, несомненно, является самое большое и красивое озеро - Виштынецкое. Необычайно большая глубина (54 м) и значите ...

Периодизация истории Земли и международные геохронологическая и стратиграфическая шкалы.
Жизнь на Земле существует около 3-3,5 млрд. лет. За этот грандиозный промежуток времени на планете происходили разнообразные геологические события: изменения климата, горообразовательные процессы, дрейф материков, наступление на сушу вод ...

Виды домашних птиц. Домашние птицы
Значение птиц в природе и жизни человека. Птицы сдерживают увеличение численности насекомых — вредителей растений, переносчиков возбудителей заболеваний животных и человека, мелких грызунов. Многие из них уничтожают семена сорных растений ...