Приготовление образцов ДНКСтраница 3
8. PSG
Этот раствор используется для отмывки простейших перед лизисом. Конечные концентрации На 1 л
75 мМ Na-фосфатный буфер 75 мл 1 М раствора
65 мМ NaCI 13 мл 3 М раствора
10% глюкоза 100 г.
Проавтоклавируйте.
|
Организм |
Концентрация клеток в 100 мкл блок-вставки |
Нагрузка на дорожку при форезе |
|
Trypanosoma brucei Plasmodium falciparum Giardia lambia Leishmania |
2х10х10 1Х10 2х10 |
1/16 1/8 1/10 1/16 |
Известно, что хромосомная ДНК из-за больших размеров молекулы чрезвычайно чувствительна к воздействию нуклеаз. В связи с этим необходимо принять за правило предварительно обрабатывать все растворы, контактирующие с ДНК. Растворы следует разлить на небольшие порции и простерилизовать. Стерильными должны быть и посуда, и оборудование. Для переноса образцов из вставок или из трубочек можно использовать изогнутую стеклянную палочку, простерилизованную в спирте и в пламени горелки. При работе с образцами ДНК нельзя пользоваться никакими приспособлениями, содержащими металлические детали, в частности из нержавеющей стали, а также шпателями и бритвенными лезвиями. ДНК прочно связывается со многими бивалентными металлами и контакт с ними обычно приводит к появлению разрывов в молекуле ДНК.
Это интересно:
Анаэробные пути ресинтеза АТФ
Анаэробные пути ресинтеза АТФ являются дополнительными способами образования АТФ в тех случаях, когда основной путь получения АТФ - аэробный - не может обеспечить мышечную деятельность необходимым количеством энергии. Это бывает на первых ...
Половое размножение. Развитие половых клеток (гаметогенез)
У более сложно организованных животных или исключительно, или, по крайней мере, преимущественно, практикуется половой способ размножения, хоть зачатки этой формы воспроизведения потомства, так сказать намек на него, встречаются и у низших ...
SDS-электрофорез в ПААГ
Белки разделяются по их молекулярным массам. Додецилсульфат натрия (SDS), связываясь с заряженными молекулами, компенсирует различия между зарядами белков.
Приготовление проб: в 30 мкл каждой фракции с DEAE-cell колонки добавляли по 15 м ...

