Приготовление образцов ДНКСтраница 3
8. PSG
Этот раствор используется для отмывки простейших перед лизисом. Конечные концентрации На 1 л
75 мМ Na-фосфатный буфер 75 мл 1 М раствора
65 мМ NaCI 13 мл 3 М раствора
10% глюкоза 100 г.
Проавтоклавируйте.
Организм |
Концентрация клеток в 100 мкл блок-вставки |
Нагрузка на дорожку при форезе |
Trypanosoma brucei Plasmodium falciparum Giardia lambia Leishmania |
2х10х10 1Х10 2х10 |
1/16 1/8 1/10 1/16 |
Известно, что хромосомная ДНК из-за больших размеров молекулы чрезвычайно чувствительна к воздействию нуклеаз. В связи с этим необходимо принять за правило предварительно обрабатывать все растворы, контактирующие с ДНК. Растворы следует разлить на небольшие порции и простерилизовать. Стерильными должны быть и посуда, и оборудование. Для переноса образцов из вставок или из трубочек можно использовать изогнутую стеклянную палочку, простерилизованную в спирте и в пламени горелки. При работе с образцами ДНК нельзя пользоваться никакими приспособлениями, содержащими металлические детали, в частности из нержавеющей стали, а также шпателями и бритвенными лезвиями. ДНК прочно связывается со многими бивалентными металлами и контакт с ними обычно приводит к появлению разрывов в молекуле ДНК.
Это интересно:
Современная (эволюционная) естественнонаучная картина мира
В XIXв обнаружена несостоятельность научной картины мира, термодинамика провозгласила парадоксальный вывод: «если бы мир был гигантской машиной, то такая машина, должна была остановиться, так как должна остановиться, т.к. запас полезной э ...
Автотрофные и гетеротрофные клетки. Фотосинтез. Хемосинтез
Автотрофные клетки. По способу получения органических соединений все клетки делятся на две группы. Одна группа клеток способна синтезировать органические вещества из неорганических соединений (СО2 и Н2О и т. д.). Из этих бедных энергией с ...
Определение активности аминотрансфераз методом Райтмана – Френкеля
АСТ в присутствии L - кетоглутарата катализирует реакцию переаминирования L - -аспартата с образованием оксалоацетата, который декарбоксилируется до пирувата /41/:
L – кетоглутарат + L - аспартат → L – глутамат + оксалоацетат ͛ ...