Приготовление образцов ДНКСтраница 3
8. PSG
Этот раствор используется для отмывки простейших перед лизисом. Конечные концентрации На 1 л
75 мМ Na-фосфатный буфер 75 мл 1 М раствора
65 мМ NaCI 13 мл 3 М раствора
10% глюкоза 100 г.
Проавтоклавируйте.
Организм |
Концентрация клеток в 100 мкл блок-вставки |
Нагрузка на дорожку при форезе |
Trypanosoma brucei Plasmodium falciparum Giardia lambia Leishmania |
2х10х10 1Х10 2х10 |
1/16 1/8 1/10 1/16 |
Известно, что хромосомная ДНК из-за больших размеров молекулы чрезвычайно чувствительна к воздействию нуклеаз. В связи с этим необходимо принять за правило предварительно обрабатывать все растворы, контактирующие с ДНК. Растворы следует разлить на небольшие порции и простерилизовать. Стерильными должны быть и посуда, и оборудование. Для переноса образцов из вставок или из трубочек можно использовать изогнутую стеклянную палочку, простерилизованную в спирте и в пламени горелки. При работе с образцами ДНК нельзя пользоваться никакими приспособлениями, содержащими металлические детали, в частности из нержавеющей стали, а также шпателями и бритвенными лезвиями. ДНК прочно связывается со многими бивалентными металлами и контакт с ними обычно приводит к появлению разрывов в молекуле ДНК.
Это интересно:
Проведение иммунодиффузии. Реагенты и приборы
Моноспецифические антисыворотки, стандартные растворы антигенов и рабочий стандарт, веронал-ацетатный буфер с pH 8,6 и ионной силой 0,1. Специальный агар Noble; стеклянные капилляры для определения гематокрита длиной около 50 мм, с внутре ...
Основные разделы биофизики
По решению Международной ассоциации общей и прикладной биофизики, к разделам этой дисциплины относятся:
1. Молекулярная биофизика. Изучает строение и физические свойства молекул, входящих в состав организма (прежде всего белков и нуклеин ...
Механизм редупликации ДНК
Здесь целесообразно лишь вкратце повторить основные представления о фундаментальных жизненных процессах: редупликации ДНК, транскрипции ее с переносом наследственной информации на иРНК и механизме трансляции — синтезе белка, направляемом ...