Твердофазный иммуноферментный анализ

Материалы » Группа пневмовирусов » Твердофазный иммуноферментный анализ

ELISA - еще один иммунологический метод быстрого обнаружения и количественного определения РСВ. Ниже приведена типичная методика.

1. Лунки планшета для иммунологических реакций покрывают зараженными или незараженными клетками, или РСВ, очищенным центрифугированием в градиенте. Это делается одним из следующих методов:

а) клетки выращивают в лунках планшета и через ряд заражают РСВ. Когда в лунках с зараженными клетками проявляется ЦПД, клетки промывают, фиксируют раствором, содержащим этанол и уксусную кислоту, и хранят при - 20 °С;

б) в лунки планшета вносят РСВ, очищенный центрифугированием в градиенте, и высушивают в течение ночи при 37°С.

Если имеются клетки, персистентно инфицированные РСВ, их можно использовать в качестве источника антигена вместо литически инфицированных клеток.

2. Перед началом анализа все лунки планшета покрывают 5% -ным раствором БСА в PBS. В каждый опыт следует включать негативный контроль и позитивный контроль. В лунки планшета вносят образцы вируса и инкубируют в течение ночи при 4°С. Планшет промывают и добавляют овечьи антитела против иммуноглобулинов мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена в рекомендуемом разведении. Планшет инкубируют 1 ч при 37 °С, промывают, добавляют субстрат, о-фенилендиамин, и инкубируют при 37 °С еще 30 мин. Реакцию останавливают добавлением 4,5 М H2SO4 и учитывают результаты с помощью ридера "Мультискан".

Хиерхольцер и др. описали методику, позволяющую с помощью ELISA количественно выявлять белковые полосы после электрофореза и переноса белков на нитроцеллюлозные мембраны, так называемый метод "вестерн-блотинга". Преимущество этого метода состоит в том, что он не требует использования радиоактивных изотопов.


Это интересно:

Разница в старении мужчин и женщин
По мнению геронтологов на основании биологических процессов, протекающих в организме женщин, они стареют медленнее и живут дольше на 6 — 8 лет. У мужчин органические изменения в тканях наступают раньше на 6 — 8 лет, то есть, биологическое ...

Охраняемые природные территории
Охраняемые территории – территории, на которых обеспечивается поддержание стабильности природной среды путём установления в административном порядке особых режимов природопользования. Это национальные парки (это объекты природоохраняемог ...

Способности и строение
Гепард действительно может нестись как вихрь. Невероятно, но этот зверь за каких-то 2 секунды с места может развить скорость 65 км/час! А потом бежать со скоростью 110 км/час! Гепард - самое быстроногое животное из наземных млекопитающих. ...