1. Зараженные клетки фиксируют, добавляя к монослою, выращенному в чашке Петри диаметром 50 мм, глутаровый. альдегид до концентрации 2,5%.

2. После фиксации в течение 30 мин монослой дважды промывают PBS и добавляют 10 капель 1% -ного раствора четы-рехокиси осмия.

3. Через 15 мин монослой еще 2 раза промывают PBS, снимают клетки со стекла и суспендируют их в 2 мл PBS.

4. Клетки осаждают центрифугированием и дегидратируют, последовательно суспендируя в растворах с возрастающей концентрацией этанола; в каждом растворе клетки инкубируют 5 мин; при необходимости их можно выдержать в течение ночи в 70% -ном этаноле. После инкубации в 90% -ном этаноле клетки дважды по 15 мин обрабатывают 100% -ным этанолом.

5. Этанол заменяют на смесь этанола и окиси пропилена.

6. Через 15 мин смесь этанол-окись пропилена заменяют на свежую, инкубируют суспензию еще 30 мин, после этого ресуспендируют клетки в смеси этанол-окись пропилена-среда EPON, а затем в среде EPON 1 ч.

7. Компактный осадок клеток наносят на небольшой объем среды EPON в капсуле ВЕЕМ и, заполнив капсулу средой EPON, инкубируют их 48 ч при 60 °С для полимеризации. После этого заключенные в капсулу клетки готовы для приготовления срезов стандартным способом на ультрамикротоме.

8. Тонкие срезы располагают на необработанных сеточках для электронной микроскопии и через 24 ч окрашивают 5 мин,, помещая сеточки препаратами вниз в каплю насыщенного раствора уранилацетата в метаноле.

9. Сеточки промывают дистиллированной водой и сушат на листе фильтровальной бумаги.

10. На срез наносят каплю 0,1 М раствора NaOH и помещают сеточку срезом вниз на 5 мин в каплю раствора ацетата свинца. Сеточки промывают и сушат на листе фильтровальной бумаги, после этого они готовы к электронно-микроскопическому исследованию.

Это интересно:

Почва
Для определения эффективности способов защиты окружающей среды необходимо познать законы ее развития и функционирования, глубоко изучить взаимосвязь составляющих биосферу компонентов, где почва в экологическом союзе имеет большое значение ...

Сенсор спиртов
В бродильных производствах необходимо непрерывно определять концентрации метанола и этанола в культуральных средах. При использовании спиртов в качестве источника углерода для культивируемых микроорганизмов концентрация спиртов должна под ...

Класс хамесифонофициевые – chamaes1phonophyceae
Сюда относятся эпифитные одноклеточные водоросли, дифференцированные на вершину и основание, которым они прикрепляются к субстрату, а также нитчатые формы, сложенные из изолированных толстостенных клеток. Размножение – посредством эндоспо ...