Определение концентрации общего холестерина (ХСобщ) в сыворотке и плазме крови энзиматическим колориметрическим методом
ПРИНЦИП МЕТОДА. При гидролизе ЭХС холестеразой образуется свободный ХС. Образуется и имеющийся в пробе ХС: окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием (РОД) перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации в пробе.
Набор
реагентов
:
CHOLESTEROL
«
E
–
D
» («
Vital
-
Diagnostics
»)
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
|
Реагенты |
Опытные пробы,(мл.) |
Калибровочные пробы, (мл.) |
Контрольные пробы, (мл.) |
|
Сыворотка или плазма |
0,02 |
_ |
_ |
|
Физ. Раствор (H2O) |
_ |
_ |
0,02 |
|
Реагент 2 |
2,0 |
2,0 |
2,0 |
|
Раствор холестерина |
_ |
0,02 |
_ |
Реакционную смесь перемешивают и инкубируют не менее 5 мин при комнатной температуре (20-25°С) или при 37°С и измеряют оптическую плотность опытных и калибровочных проб против контрольной пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 см (1 см.) при длине волны 500 нм (ФЭК- 490 нм). Окраска стабильна не менее 2-х часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.
Расчет концентрации холестерина проводят по формуле:
С = [Ео/Ест ] * 5,17 (ммоль/л) или С =[ Ео/Ест ] * 200 (мг/100 мл)
Ео и Ест – экстинция образца и стандарта, измеряется относительно контрольной пробы.
Это интересно:
Приготовление вставок с образцами ДНК
простейших
Свободно живущие простейшие могут быть прямо использованы для приготовления вставок с препаратами ДНК. Их можно отделить от культуральной среды центрифугированием. Перед приготовлением вставок внутриклеточных паразитов выделяют из клеток ...
Получение персистентно инфицированных клеточных
культур
Персистентной инфекции культур клеток при полном отсутствии ЦПД или минимальном его проявлении можно добиться несколькими способами. Одним из них является пассирование вируса с высокой множественностью инфекции и пересев выживающих клеток ...
Как происходит деление клеток, ядра и
ДНК? Как реализуется система воспроизводства на молекулярном уровне? В чем
особенности биотехнологий: генной и клеточной инженерии, каковы их возможности
и пер
Деление клеток - основа роста и размножения организмов, передачи наследственной информации от материнского организма (клетки) к дочернему, что обеспечивает их сходство. Деление клеток образовательной ткани - причина роста корня и побега в ...