Определение концентрации ХС-ЛВП (холестерина-липопротеидов высокой плотности) (HDL) в сыворотке и плазме крови

Материалы » Антиатеросклеротическое действие смеси масел льна и расторопши с селенопираном » Определение концентрации ХС-ЛВП (холестерина-липопротеидов высокой плотности) (HDL) в сыворотке и плазме крови

ПРИНЦИП МЕТОДА.

Хиломикроны, липопротеиды низкой плотности (LDL) и липопротеиды очень низкой плотности (V LDL) осаждаются при добавлении к образцу фосфовольфрамат/Mg²+. После центрифугирования в супернатанте остаются только

HDL, концентрация которых определяется так же как концентрация общего холестерина.

Набор

реагентов

: HDL CHOLESTEROL «FL - E» («Vital-Diagnostics»)

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

1. Преципитация

Реагенты

Опытные пробы, (мл.)

Калибровочные пробы, (мл.)

Контрольные пробы, (мл.)

Сыворотка или плазма

0,15

_

_

H2O

_

_

0,15

Осаждающий реагент

0,3

0,3

0,3

Раствор холестерина

_

0,15

_

Хорошо перемешать и оставить на 10 мин при комнатной температуре. Опытные пробы отцентрифугировать в течение 10 мин при 4000g или 1-2 мин 1000g. Прозрачный супернатант использовать для определения концентрации HDL. Калибровочные и контрольные пробы центрифугировать не нужно. Определение холестерина во всех пробах в течение часа.

2. Определение концентрации HDL

Реагенты

Опытные пробы, (мл.)

Калибровочные пробы, (мл.)

Контрольные пробы, (мл.)

Супернатант

0,2

_

-

H2O+ реагент №1

_

_

0,2

Рабочий реагент для определ. холестерина

0,2

0,2

0,2

Раствор холестерина+реагент №1

_

0,2

_

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 мин при комнатной температуре (20-25°С) или 5 мин при 37°С и измеряют оптическую плотность опытных и калибровочных проб против контрольной пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 см (1 см.) при длине волны 500 нм (ФЭК- 490 нм). Окраска стабильна не менее 2-х часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Расчет концентрации (С) холестерина HDL проводят по формуле:

С = Ео/Ест * 1,29 (ммоль/л) или С = Ео/Ест * 50 (мг/100 мл) Ео и Ест – экстинция образца и стандарта, измеряется относительно контрольной пробы.


Это интересно:

Коллекция листьев поврежденных насекомыми
Задание №3 - собрать коллекцию листьев поврежденных насекомыми: галлы, погрызы, повреждения листовертками. Листовертка - мелкая молевидная бабочка, размах крыльев не больше 2,5 см, с довольно толстым телом, покрытым густыми волосками, с ...

Паразитоценозы. Структура паразитоценозов
Особая трофическая связь в биоценозе – паразитизм, при котором один вид – хозяин - служит для другого – паразита - не только источником пищи, но и местом постоянного или временного обитания. В процессе эволюции паразит специализируется в ...

Современные научные взгляды на эволюцию жизни (концепция неодарвинизма)
Из теории Дарвина следует что, наследственность связана с «неопределенной изменчивостью», которая может передаваться потомкам. Как уже было сказано, ключевой принцип дарвинизма – постепенная изменчивость. В противоположность этому в случ ...