Определение концентрации ХС-ЛВП (холестерина-липопротеидов высокой плотности) (HDL) в сыворотке и плазме крови
ПРИНЦИП МЕТОДА.
Хиломикроны, липопротеиды низкой плотности (LDL) и липопротеиды очень низкой плотности (V LDL) осаждаются при добавлении к образцу фосфовольфрамат/Mg²+. После центрифугирования в супернатанте остаются только
HDL, концентрация которых определяется так же как концентрация общего холестерина.
Набор
реагентов
: HDL CHOLESTEROL «FL - E» («Vital-Diagnostics»)
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
1. Преципитация
|
Реагенты |
Опытные пробы, (мл.) |
Калибровочные пробы, (мл.) |
Контрольные пробы, (мл.) |
|
Сыворотка или плазма |
0,15 |
_ |
_ |
|
H2O |
_ |
_ |
0,15 |
|
Осаждающий реагент |
0,3 |
0,3 |
0,3 |
|
Раствор холестерина |
_ |
0,15 |
_ |
Хорошо перемешать и оставить на 10 мин при комнатной температуре. Опытные пробы отцентрифугировать в течение 10 мин при 4000g или 1-2 мин 1000g. Прозрачный супернатант использовать для определения концентрации HDL. Калибровочные и контрольные пробы центрифугировать не нужно. Определение холестерина во всех пробах в течение часа.
2. Определение концентрации HDL
|
Реагенты |
Опытные пробы, (мл.) |
Калибровочные пробы, (мл.) |
Контрольные пробы, (мл.) |
|
Супернатант |
0,2 |
_ |
- |
|
H2O+ реагент №1 |
_ |
_ |
0,2 |
|
Рабочий реагент для определ. холестерина |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
|
Раствор холестерина+реагент №1 |
_ |
0,2 |
_ |
Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 мин при комнатной температуре (20-25°С) или 5 мин при 37°С и измеряют оптическую плотность опытных и калибровочных проб против контрольной пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 см (1 см.) при длине волны 500 нм (ФЭК- 490 нм). Окраска стабильна не менее 2-х часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.
Расчет концентрации (С) холестерина HDL проводят по формуле:
С = Ео/Ест * 1,29 (ммоль/л) или С = Ео/Ест * 50 (мг/100 мл) Ео и Ест – экстинция образца и стандарта, измеряется относительно контрольной пробы.
Это интересно:
Коллекция листьев поврежденных насекомыми
Задание №3 - собрать коллекцию листьев поврежденных насекомыми: галлы, погрызы, повреждения листовертками. Листовертка -
мелкая молевидная бабочка, размах крыльев не больше 2,5 см, с довольно толстым телом, покрытым густыми волосками, с ...
Паразитоценозы. Структура паразитоценозов
Особая трофическая связь в биоценозе – паразитизм, при котором один вид – хозяин - служит для другого – паразита - не только источником пищи, но и местом постоянного или временного обитания. В процессе эволюции паразит специализируется в ...
Современные научные взгляды на эволюцию жизни (концепция неодарвинизма)
Из теории Дарвина следует что, наследственность связана с «неопределенной изменчивостью», которая может передаваться потомкам. Как уже было сказано,
ключевой принцип дарвинизма – постепенная изменчивость. В противоположность этому в случ ...