За основу взят классический метод Гаврилова В.Б. и соавт [9], Владимирова Ю.А. и соавт. [7]. 0,4 мл плазмы вносят в пробирку с плотной крышкой и добавляют 4 мл чисто перегнанной смеси изопропанол : гептан (1:1). Смесь встряхивают в течение 20-30 мин затем добавляют 1 мл HCl (pH=2) после чего еще раз встряхивают две минуты, добавляют 2 мл чисто перегнанного гептана и снова встряхивают 10-15 мин. Примерно через час отбирают верхнюю фазу и фотометрируют при 232 нм против контрольной пробы где вместо гемолизата взято 0,2 мл H2O. Коэффициент экстинции 2,2 * 10 -5 см-1 М-1.

Формула для расчета (при l=1 см):

С(нмоль/мл пл) = [(∆А* 106)/(2,2*105*1)]*[4/Vпроб], где: ∆А = Аоп - Афон, 2,2*105 – коэффициент экстинции, 1 (см) = L (толщина кюветы), 2 (мл) = Vгепт (объем гептана)

Это интересно:

Витамин F
Витамин F (комплекс ненасыщенных жирных кислот: линолевой, линоленовой, арахидоновой). Жирорастворимый витамин. В организме человека не синтезируется. Регулирует процессы липолиза и липогенеза в организме, обладает липотропным действием, ...

Радиоактивное мечение вирионной РНК
Интактную вирионную РНК РСВ получить трудно; рекомендуется следующая методика. Очищенный радиоактивно меченный вирус получают, РНК экстрагируют фенолом и далее из водной фазы осаждают этанолом. Выделенную РНК очищают центрифугированием ...

Практическое использование ДГГЭ
Приведенные здесь схемы ДГГЭ обеспечивают более высокую разрешающую способность и эффективность обнаружения мутаций за счет использования гетеродуплексов. Их основные этапы приведены на рис. 4. Исследуемые препараты ДНК отжигают с меченым ...