Выявление и определение количества стафилококков в пищевых продуктах
Страница 2

Материалы » Стафилококки - возбудители пищевых токсикозов » Выявление и определение количества стафилококков в пищевых продуктах

Характерные признаки роста S.aureus на плотных средах приведены ниже.

Агар Байрда–Паркера Колонии черные, блестящие, круглые, диаметром 1,5 – 2,5 мм, окружены зоной лецитиназной активности

Агар молочно-солевой Колонии черные, блестящие, круглые, диаметром 1,5–2,5 мм, окружены зоной лецитиназной активности

Агар яично-желточно – азидный и яично-желточно-солевой

Колонии черные, блестящие, круглые, диаметром 1,5–2,5 мм, окружены зоной лецитиназной активности

Колонии круглые, диаметром 2–2,5 мм, слегка возвышающиеся над поверхностью агара, с ровными края ми, окрашены в желтый, золотистый, лимонно-желтый, кремовый, палевый или белый цвет

Для подсчета количества S.aureus отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний. Для подтверждения наличия в продукте стафилококка отбирают не менее 5 характерных колоний и пересевают на скошенный мясопептонный агар. Через 24 ч после термостатирования при 36+1°С определяют морфологию в мазках, окрашенных по Граму, способность коагулировать плазму крови кролика, образовывать каталазу и ферментировать мальтозу в анаэробных условиях.

S.aureus – грамположительные клетки шарообразной формы диаметром 0,6–1 мкм, располагающиеся чаще (но не всегда) в виде скоплений, напоминающих гроздья винограда.

Способность выросших микроорганизмов образовывать каталазу определяют по методу, указанному выше. S.aureus образует каталазу. У грамположительных микроорганизмов, образующих каталазу, выявляют способность коагулировать плазму крови кролика. Для этого к плазме крови кролика добавляют по одной петле испытуемых культур, оставляя одну пробирку с разведенной плазмой незасеянной (контроль). Внесенную культуру тщательно размешивают и пробирку помещают в термостат при 36±1°С. Если через 6 ч коагуляции плазмы не произошло, то пробирку оставляют при 30+1°С на 24 ч. Если плазма не скоагулировала, то испытуемую культуру стафилококка относят к коагулазоотрицательной. Реакцию плазмокоагуляции считают отрицательной и в случаях, когда в плазме не образуются отдельные нити или сгустки либо появляются единичные нити (реакцию оценивают одним плюсом).

Реакцию считают положительной, если в плазме образовался небольшой компактный сгусток (два плюса); большой уплотненный сгусток (три плюса); плазма вся скоагулировала, сгусток не меняет своего положения при перевертывании пробирки (четыре плюса).

Для ускорения выявления коагулазоположительных стафилококков вместо агаровых культур допускается применять культуру, выращенную на мясопептонном бульоне. Ее используют для постановки реакции плазмокоагуляции спустя 2 ч после появления видимых признаков роста микроорганизмов. К 0,5 см3 разведенной плазмы добавляют 2 капли суточной бульонной культуры, учет результатов проводят в сроки от 30 мин до 2–4 ч. Реакцию оценивают плюсами (от одного до четырех).

Способность ферментировать мальтозу в анаэробных условиях определяют с целью дифференциации S.aureus от других коагулазоположительных видов – S. intermedius и S. hyicus subsp. hyicus (S.aureus ферментирует мальтозу в анаэробных условиях, S. intermedius ферментирует ее слабо, S. hyicus subsp. hyicus не ферментирует). Культуры, подлежащие исследованию, высевают уколом петлей в среду Гисса с мальтозой. На поверхность среды наслаивают голодный агар высотой 2–2,5 см. Посевы инкубируют при 36±1°С в течение 48 ч. При ферментации мальтозы в анаэробных условиях с образованием кислоты цвет среды Гисса изменится.

Если в посевах обнаружены грамположительные кокки, способные коагулировать плазму крови, образующие каталазу, ферментирующие мальтозу в анаэробных условиях, то выявленные микроорганизмы относят к S.aureus.

При определении потенциальной энтеротоксичности выделенных культур S.aureus устанавливают их способность образовывать термостабильную нуклеазу. Для этого в среде с ДНК, разлитой в чашки Петри, вырезают асептически «колодцы» диаметром не более 4 мм, на расстоянии не менее 7–8 мм друг от друга. Культуры,

выросшие на мясопептонном бульоне после инкубирования при 36±1°С в течение 24 ч, прогревают на кипящей водяной бане 15 мин, охлаждают до комнатной температуры и вносят по 1–2 капли в «колодцы» пастеровской пипеткой. Засеянные чашки помещают в термостат при 36±1°С, результаты учитывают через 1,2 и 5 ч. При наличии термостабильной нуклеазы вокруг «колодцев» появляется ярко-розовая зона на синем фоне среды.

Страницы: 1 2 3 4 5


Это интересно:

Оценка метода
Преимущества нефелометрии – относительная простота и быстрота процедуры, а также возможность ее автоматизации. Однако этот метод предъявляет особые требования к качеству антисыворотки. Она должна содержать достаточно антител, чтобы в разв ...

Катепсины
Катепсины - (от греч. kathepso-перевариваю), ферменты класса гидролаз, катализирующие гидролиз пептидной связи. Содержатся в тканях животных и человека. Неспецифический протеолиз играет важную роль в регуляции белкового обмена, в ходе кот ...

Внимание и память
Значимость для нас какого-либо события определяется нашей внутренней потребностью, нашей заинтересованностью, поставленной целью. Преобладающая в данный момент потребность руководит всем текущим поведением организма. А. А. Ухтомский откры ...